リンパ管新生の検討と癌由来の血管、リンパ管新生抑制遺伝子の探索

检查淋巴管生成并寻找癌源性血管和淋巴管生成抑制基因

基本信息

批准号：
07J02800
负责人：
齊藤幸裕
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J02800/
关键词：
血管新生リンパ管新生遺伝子治療癌転移

项目摘要

癌の増殖、転移には癌由来の血管、リンパ管新生因子が関与するため、これらの制御は予後向上のための治療標的となる。そこで我々は癌由来の抗血管、リンパ管新生制御因子を探索するため研究を行った。マウス肺癌LL/2細胞よりcDNAライブラリーを構築し、独自のHVJ-Eを用いたHigh Throughput Functional Screeningにより増殖抑制候補遺伝子cold shock domain protein A(CSDA)を特定した。CSDAは血管内皮細胞(HAEC)、リンパ管内皮細胞(LEC)両方の増殖能を抑制した(c-fos promoter assay;84.9%inhibition in HAEC,97.3%inhibition in LEC under10%FBS condition)。正常組織では骨格筋と心臓に特異的に高発現し、血管・リンパ管内皮細胞にもわずかに発現していることを確認した。細胞内局在は主として核であった。Deletion mutantによる検討により、この増殖抑制活性にはcold shock domainが必須であることを確認した。CSDAの増殖抑制の作用機序として、既報のHypoxia inducible factor-1の作用抑制に加えて、serum response region(SRE)を抑制することを確認した(SRE assay:45.1%inhibition in HAEC,97.0%inhibition in LEC under10%FBS condition)。生体でのCSDAの作用を確認するために、マウス背部皮下にLL/2細胞を移植した担癌マウスモデルにCSDAを反復して遺伝子導入すると、腫瘍周辺の血流低下と転移減少の傾向を認めた。CSDAは血管、リンパ管新生を同時に抑制しうる新規の制御遺伝子であり、癌治療の次世代の治療戦略となりうることが示唆された。さらに我々はCSDAが正常心筋、骨格筋に発現していることに着目した。検討の結果CSDAは心筋、骨格筋において血管新生の内因性制御因子として機能していることが明らかとなり、これをノックダウンすることで増殖因子を添加することなしで、血管新生を誘導することが可能なことを見出した。またCSDAは癌化の過程で、白血病、子宮癌、肺癌、大腸癌、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌で発現することがわかった。このことはCSDAが癌の発生、進展に機能を有していることを示唆しており、新たな腫瘍マーカー、悪性度診断マーカーとなりうる可能性があることを示している。

由于癌症衍生的血管和淋巴管构成因子参与癌症的生长和转移，因此这些对照是改善预后的治疗靶标。因此，我们进行了研究，以探索源自癌症的抗血管和淋巴管生成调节剂。通过小鼠肺癌LL/2细胞构建cDNA文库，并通过使用专有的HVJ-E筛选较高的吞吐量函数筛选来鉴定生长抑制性候选基因Cold Shoct域蛋白A（CSDA）。 CSDA抑制了血管内皮细胞（HAEC）和淋巴内皮细胞（LEC）（C-FOS启动子测定法； HAEC中的84.9％抑制作用，在LEC 10％FBS条件下抑制97.3％）的增殖能力。已证实它是在正常组织中特别表达的，在正常组织中，在血管和淋巴内皮细胞中略微表达。亚细胞定位主要在细胞核中。通过使用缺失突变体检查结果，可以证实冷休克域对于这种抑制活性至关重要。作为抑制CSDA生长的一种机制，我们证实，除了抑制先前报道的缺氧诱导因子1的作用外，它还抑制了血清反应区域（SRE）（SRE分析：HAEC中的45.1％抑制作用，在10％FBS条件下LEC中的抑制作用为97.0％）。为了确认CSDA在活生物体中的影响，将CSDA反复转移到含有肿瘤的小鼠模型中，其中LL/2细胞皮下植入了背部小鼠，显示出降低血液流动并减少肿瘤周围转移的趋势。已经提出，CSDA是一种新型的调节基因，可以同时抑制血管和淋巴管生成，并且可能是癌症治疗的下一代治疗策略。此外，我们专注于CSDA在正常的心肌和骨骼肌中表达的事实。该研究的结果表明，CSDA是心肌和骨骼肌血管生成的内源性调节剂，通过将其击倒，发现可以诱导血管生成而无需添加生长因子。还发现，在癌症过程中，CSDA表现在白血病，子宫癌，肺癌，结肠癌，恶性淋巴瘤，恶性黑色素瘤和甲状腺癌。这表明CSDA具有发展和发展癌症的功能，表明它可能是一种新的肿瘤标记和恶性诊断标记。