Identifizierung und Charakterisierung von Proteinen, welche auf die Kernhülle bildende Vesikel lokalisiert sind

定位于形成核膜的囊泡的蛋白质的鉴定和表征

• 批准号: 5359314
• 负责人: Professor Dr. Wolfram Antonin
• 金额: --
• 依托单位: Europäisches Laboratorium für Molekularbiologie (EMBL)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5359314?language=en
• 关键词: Identifizierung; und; Charakterisierung; von; Proteinen

In höheren Eukaryonten ist die Kernhülle bestehend aus äußerer und innerer Kernmembran während des Zellzyklus eine hochdynamische Struktur. Sie wird beim Eintritt der Zelle in die Mitose dissoziiert und in der Telophase um die Tochterchromosomen wieder assoziiert. Die molekularen Mechanismen, die zur Ausbildung der Kernmembranen führen, sind zum gegenwärtigen Zeitpunkt weitgehend unklar. Dieser Prozess kann in einem zellfreien Testsystem aus Eiern von Xenopus laevis untersucht werden. In diesem Testsystem konnte gezeigt werden, dass zur Ausbildung der Kernmembran zwei Populationen von Vesikeln und die kleine GTPase Ran benötigt werden. Das hier vorgeschlagene Forschungsvorhaben beinhaltet die biochemische Charakterisierung der Membran dieser Vesikel. Es sollen zum einen auf diesen Vesikeln Effektorproteine von Ran identifiziert werden. Hierzu soll ein Detergenzextrakt der Vesikel an eine Ran-GTP und Ran-GDP-Affinitätssäule gebunden werden. Ran bindende Proteine sollen durch massenspektrometrische Analyse identifiziert werden. In einem weiteren allgemeineren Ansatz sollen integrale Membranproteine der Vesikel durch eine Triton-X-114-Phasentrennung angereichert und eventuell nach Analyse durch zweidimensionale Gelelektrophorese durch Massenspektroskopie identifiziert werden. Durch die beiden Ansätze neu identifizierte Proteine sollen kloniert und biochemisch charakterisiert werden. Ihre Bedeutung für die Ausbildung der Kernhülle soll im zellfreien Testsystem durch Depletion oder Inhibierung untersucht werden.

在这里，Eukaryonten is die Kernhülle bestehend aus äußerer and innerer Kernmembran während des Zellzyklus eine hochdynamische Struktur.在有丝分裂期和染色体分裂末期，你将成为一个完整的细胞。Die molekularen Mechanismen，die zur Ausbildung der Kernmembranen führen，sind zum gegenwärtigen Zeitpunkt weitgehend unklar.这一过程可以在非洲爪蟾韦尔登的一个活体测试系统中进行。在这个测试系统中，两个核心成员的培养都是韦尔登的结果，两个核心成员的培养都是韦尔登的结果。这种生物化学研究具有膜的生物化学特性。这是一个解决方案，以提高这种有效的蛋白质对韦尔登的识别。因此，需要对Vesikel进行去污，并对Ran-GTP和Ran-GDP-Affinitätssäule进行韦尔登。通过质谱分析鉴定分离出结合蛋白质韦尔登。通过Triton-X-114-Phasentrennung angereichert和双向凝胶电泳通过质谱鉴定韦尔登进行分析，可以获得所有完整的Vesikel膜蛋白。因此，我们需要对蛋白质的克隆和生物化学特性进行鉴别，以确定其韦尔登。Ihre Bedutung für die Ausbildung der Kernhülle soll im zellfreien Testsystem durch Deflection or der Inhibierung untersucht韦尔登.