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酸化ストレスで誘導されるトレハローストランスポーター遺伝子の発現制御機構の解明

氧化应激诱导的海藻糖转运蛋白基因表达调控机制的阐明

基本信息

批准号：
12J10839
负责人：
菊田真吾
金额：
$ 1.54万
依托单位：
National Institute of Agrobiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の実施内容は、ネムリユスリカトレハローストランスポーター遺伝子PvTRET1転写開始点上流近傍に存在する酸化ストレス応答性エンハンサー領域の特定である。前年度に構築済みの高効率且つ安価な直接的転写活性量測定法に基づき、実験を行った。遺伝子導入及び発現効率の低下という問題に直面した。これは、樹立された細胞株の安定性に寄与するものと想定された。本課題で基準となるEf1a遺伝子プロモーターの配列から、別のhouse keeping遺伝子の再選定を行った。候補遺伝子の選定は農業生物資源研究所昆虫機能研究開発ユニットで整備されつつあるネムリユスリカゲノムデータベース上で、乾燥及び吸水過程に関わらず、安定的に高発現の遺伝子上位3つをピックアップした。プロモーター領域は困難であったため、上流に隣接する遺伝子の末端までのゲノムDNAを既に構築済みのPvEf1aプロモーター領域と組み替えた。その結果、PvEd1aよりも、PvGAPDH遺伝子のプロモーターの方が高効率に遺伝子を導人・発現することができた。また、遺伝子導入装置の電気パルス条件、バッファ、DNA濃度も再設定しなおしたことで、解析に十分なサンプルの調整が可能となった。

This year's implementation of the content of production and distribution of PvTRET1 near the writing start point of the existence of acid distribution and distribution of specific areas In the past year, we have established a high-efficiency and safe method for the determination of activity. To face the problem of low transmission efficiency The stability of the cell line was determined by the stability of the cell line. This topic is based on Ef1a gene selection and re-selection of different house keeping genes. Research on insect function of selected candidate genes Research Institute of Agricultural Biological Resources Development of insect function on the basis of drying and water absorption process related to high occurrence and stability PvEf1a is a domain that is difficult to construct and is adjacent to the end of the gene. As a result, PvEd1a, PvGAPDH, and PvGAPDH have a high efficiency. The electrical conditions of the gene introduction device, the DNA concentration, and the adjustment of the analysis results are possible.