細胞接着分子ＣＡＤＭ１による新たながん転移抑制機構の解析

细胞粘附分子CADM1抑制癌症转移新机制分析

• 批准号: 14J01212
• 负责人: 小粥 浩之
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J01212/
• 关键词: 細胞接着分子; がん抑制遺伝子; 細胞死; CADM1

１．抗CADM1抗体と抗caspase-7抗体を用いて免疫沈降法を行った結果、通常培養下ではCADM1はcaspase-7と複合体を形成しないことが示された。２．MCF-7/空ベクター発現細胞株（以下、ベクター細胞株）、MCF-7/CADM1高発現細胞株（以下、CADM1細胞株）、MCF-7/CADM-NAAN高発現細胞株（CADM1のcaspase認識配列変異体。以下、NAAN変異細胞株）の浮遊・単細胞培養中にCADM1細胞外領域断片（CADM1-EC-Fc）を添加すると、ベクター細胞株ではCADM1-EC-Fcとの相互作用は検出されなかったが、CADM1細胞株とNAAN変異細胞株では検出することができた。また、ベクター細胞株とNAAN変異細胞株ではCADM1-EC-Fcによる細胞死抑制効果は見られないことが示された。３．ベクター細胞株、CADM1細胞株、NAAN変異細胞株を、caspase阻害剤Z-VAD-FMK存在下で浮遊・単細胞培養を行った。その後、SubG1細胞を測定することでアポトーシス細胞の割合を検出した。その結果、トリパンブルー排除法の結果同様、CADM1細胞株ではSubG1細胞の割合が多く、またZ-VAD-FMKの添加によりSubG１細胞の割合が有意に減少することが示された。４．CADM1細胞内領域のペプチド断片をMCF-7細胞内に直接導入し、共焦点顕微鏡を用いて局在を観察した。その結果、コントロールと比較してペプチド断片を導入した細胞では核内にペプチド断片が局在する像が観察された。また、以前のペプチド導入実験で細胞死誘導への関与が示唆されたC末端アミノ酸の変異欠損型CADM1を安定高発現するMCF-7細胞株 (以下、CADM1-C末欠損細胞株) を樹立し、浮遊・単細胞培養を行った後にトリパンブルー排除法で死細胞の割合を測定した。その結果、ベクター細胞株と比較してCADM1-C末欠損細胞株の死細胞の割合に差は見られなかった。

1. と CADM1 antibody resisting caspase - antibody を "7" い を line っ て immune sink method た result, usually develop で は CADM1 は caspase - 7 と complex を form し な い こ と が shown さ れ た. 2. MCF-7/ empty ベ, タ and タ <s:1> cell lines (hereinafter referred to as ベ, タ and <s:1> cell lines), MCF-7/CADM1 highly prevalent cell lines (hereinafter referred to as CADM1 cell lines), MCF-7/CADM-NAAN highly prevalent cell lines (CADM1 + caspase recognition and coordination variants). Here, NAAN - different cell lines) の planktonic · 単 cell cultures に CADM1 extracellular domain fragment (CADM1 - EC - Fc) を add す る と, ベ ク タ ー cell lines で は CADM1 - EC - Fc と の interaction は 検 out さ れ な か っ た が, CADM1 cell lines と NAAN - different cell lines で は 検 out す る こ と が Youdaoplaceholder0 た た. ま た, ベ ク タ ー cell lines と NAAN - different cell lines で は CADM1 - EC - Fc に よ る cell death inhibiting unseen fruit は see ら れ な い こ と が shown さ れ た. 3 Youdaoplaceholder3 floating · 単 cell culture を row った in the presence of ベ タ タ タ cell line, CADM1 cell line, NAAN variant cell line を, caspase inhibitor Z-VAD-FMK. After そ そ, SubG1 cells を were used to determine する する とでアポト シス シス シス cells <s:1> were cut and を検 was obtained. Youdaoplaceholder6 そ の results, ト リ パ ン ブ ル ー の results with others, exclusions CADM1 cell lines で は SubG1 cells の cut more than が く, ま た Z - VAD - FMK produce most の add に よ り SubG1 cells の cut close が intentionally に reduce す る こ と が shown さ れ た. 4. CADM1 intracellular domain <s:1> ペプチド fragment をMCF-7 intracellular に direct introduction, confocal 顕 microscope を use て て local area を観 to observe た た. そ の results, コ ン ト ロ ー ル と compare し て ペ プ チ ド fragment を import し た cells で は intranuclear に ペ プ チ ド fragment が bureau in す る like が 観 examine さ れ た. ま た, before の ペ プ チ ド import be 験 で induced cell death へ の masato and が in stopping さ れ た C terminal ア ミ ノ acid の - different owe damage type CADM1 を stability and high 発 now す る MCF - 7 cell line (hereinafter, CADM1 - C owe loss at the end of the cell lines) を し, plankton, line 単 cell culture を っ た after に ト リ パ ン ブ ル ー の で dead cells, cut or exclusions を determination し た. The results of そ <s:1>, ベ <s:1> タ タ, と comparison of と cell lines of <s:1> てCADM1-C terminal underdamaged cell lines, に difference in <s:1> dead cell <e:1> cut, に can be found in られな と った った.

项目成果

The role of CADM1 in suppression of cancer cell metastasis as a new type of dependence receptor.

CADM1作为一种新型依赖性受体在抑制癌细胞转移中的作用。

• 发表时间: 2014
• 作者: Hiroyuki Kogai;Mika Sakurai-Yageta;Yoshinori Murakami.
• 通讯作者: Yoshinori Murakami.

Involement of CADM1 in apoptosis induction of detached epithelial cells as a new type of dependence receptor.

CADM1 作为一种新型依赖性受体参与分离上皮细胞凋亡诱导。

• 发表时间: 2014
• 作者: 小粥浩之;櫻井美佳;村上善則.
• 通讯作者: 村上善則.