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ヒストンシャペロンおよびその複合体のX線結晶構造解析

组蛋白伴侣及其复合物的X射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
08J05113
负责人：
赤井祐介
金额：
$ 0.77万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (2009)The University of Tokyo (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、ヌクレオソーム構造変換に関わるタンパク質群の大量発現、精製、結晶化、in vitroにおける機能解析を行い、以下の結果が得られた。CIA/ASF1-ブロモドメイン複合体の構造-機能解析に関しては、CIA/ASF1-ブロモドメイン複合体の立体構造情報を基に、遺伝学的・生化学的・ChIP解析を進めた結果、「アセチル化ヒストンを認識するブロモドメインを介してCIA/ASF1が特定のヌクレオソーム上にリクルートされ、CIA/ASF1がブロモドメインからヒストンへと受け渡されてヌクレオソーム構造を破壊することで遺伝子の発現を制御する」という分子機構モデルを導きだすことができた。これらの研究成果は、部位特異的なヌクレオソーム構造変換の分子機構に迫る成果としてPNAS誌に掲載された。TAF-Iβ-ヒストンH3-H4複合体の解析に関しては、2種類のタンパク質の大量発現・精製系を確立し、常時、結晶化できる体制を整えることができた。これらの精製評品を用いて、ハンギングドロップ蒸気拡散法により結晶化を行った結果、塩を沈殿剤とする結晶化条件において、針状の沈殿物が析出することが分かった。この針状の析出物を利用してミクロシーディングを行ったところ、数ヶ月が経過して時点で単結晶を得ることに成功した。今後、結晶化条件のスクリーニングや条件の最適化を行うことで、構造解析に使用できるレベルの結晶が得られることが期待される。

This year, the following results were obtained from the functional analysis of a large number of production, purification, crystallization and in vitro of the substance group related to the structural transformation. Structure-function analysis of CIA/ASF1-receptor complex, based on three-dimensional structural information of CIA/ASF1-receptor complex, genetic, biochemical, ChIP analysis, results of "recognition of receptor complex", CIA/ASF1-receptor complex analysis, CIA/ASF1 is a molecular mechanism for controlling the occurrence of a virus. The results of these studies are reported in the PNAS journal on the basis of site-specific molecular mechanisms. The analysis of TAF-Iβ-ST-H3-H4 complex is related to the establishment of a large number of production and purification systems for the two types of crystals. The results of crystallization and precipitation conditions of needle-like precipitate were obtained by the method of evaporation and dispersion. The needle-like precipitate was successfully crystallized after several months. From now on, crystallization conditions are optimized and structural analysis is used.