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染色体複製制御に関わるInitiator Titration機構の解明

阐明染色体复制控制中涉及的引发剂滴定机制

基本信息

批准号：
20570164
负责人：
小川徹
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20570164/
关键词：
DNA複製 DnaA 大腸菌蛍光タンパク質

项目摘要

複製開始反応は細胞周期の決まった時期に1回だけ起きるように厳密に制御されている。本研究では大腸菌細胞周期における複製開始タンパク質DnaAの挙動を解明する目的で以下の研究を行った。(1)細胞周期におけるDnaAタンパク質の細胞内局在DnaAの挙動を生細胞内で観察することはこれまで世界各地で試みられていたが困難であった。我々は、ドメインIIの生育に必須でない配列を同定し、その一部分をEYFPと置換することにより初めて観察に成功した。DnaA-EYFP発現株の解析から、DnaAは、これまでの報告と異なって核様体DNA上に存在しており、しかもかなりの部分はDNA上の限られた部位に集合していることを見いだした。さらに、この集合体が細胞周期を通じて複製起点oriCとInitiator titrationに関わる部位datAの間をダイナミックに行き来していることが示唆された。(2)DnaAタンパク質の細胞内局在を制御する因子の同定複製を正に制御することが知られているDiaAの欠失下では、複製開始時の細胞でDnaA-EYFP集合体の形成が著しく低下していた。DnaAのoriCへの集合にDiaAが関わっていることが示された。一方、複製を負に制御することが知られているSeqAの欠失下では、複製開始時の細胞でDnaA-EYFP集合体の数が著しく増加していた。SeqAがDnaAのoriCへの集合を阻害していることをビジュアルに示すことが出来た。また、IHFおよびFISがDnaA-EYFP集合体形成の時期と効率の制御に関わっていることが判明した。

Replication begins in reverse, and cell cycle decisions begin in reverse. The aim of this study is to elucidate the initiation of replication and the movement of DNA in E. coli cells. (1)Cell cycle analysis is difficult to detect in cells where DNAA activity occurs. I want you to know that I'm a part of the EYFP. DnaA-EYFP discovery plant analysis, DnaA-EYFP discovery plant analysis, DnaA-EYFP discovery plant analysis, DnaA-EYFP discovery plant analysis The cell cycle of the aggregate is related to the origin of replication, the Initiator titer, and the position of datA. (2) The formation of DnaA-EYFP aggregates in cells where DnaA-EYFP is present at the start of replication and when DnaA-EYFP is present at the start of replication. DnaA's oriC The number of DnaA-EYFP aggregates at the start of replication increased. SeqA and DnaA's oriC set are blocked. IHF and FIS were used to determine the formation period and control rate of DnaA-EYFP aggregates.