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大腸菌染色体複製開始における転写およびDnaA蛋白の機能

DnaA 蛋白在大肠杆菌染色体复制起始中的转录和功能

基本信息

批准号：
03261207
负责人：
小川徹
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03261207/
关键词：
oriC DNA複製転写複製開始反応緊縮調節

项目摘要

複製開始に関与するRNAを知る目的で、まず大腸菌プラスミドを用いてoriC近傍に存在するプロモ-タ-からの転写開始がプラスミドの複製能に及ぼす影響を検討した。複製能はpolA株トランスフォ-メ-ションの効率、トランスフォ-マント中でのプラスミドのコピ-数及び安定性、さらにin vitro複製反応における鋳型活性を測定することにより検定した。その結果、これまで示唆されていたmioCプロモ-タ-からの転写以上に、oriCに左接するgidプロモ-タ-からの左向きの転写が複製開始により大きく関与しており、両方の転写が協調的に寄与していることが示唆された。またこれら2つのプロモ-タ-からの転写は緊縮調節を受けていることが判明した。次に転写反応の複製開始への関与の様式を知る目的で、最少必須領域を含み、gidおよびmioCプロモ-タ-は含まないoriCとpBR322のキメラプラスミドを作成し、このプラスミドにラクト-スオペロンプロモ-タ-を挿入して、プロモ-タ-の位置および方向とプラスミドの複製能との関係を検討した。oriCの左側から左向きに進む転写が最も複製活性化に効果があり、次にoriC右外側から左向きにoriCを通過する転写が複製活性化能があることが判明した。また、oriCの左外側から右向きにoriCを通過する転写は複製活性化能が非常に低いことが判明した。in vivoでは転写はRーloop形成ではなくDNAに負の超らせん構造を与えることによりDnaAによる二本鎖開裂を引き起こすというモデルが、より妥当と考えられる。一方、宿主染色体上のgidおよびmioCの両プロモ-タ-を同時に欠失させても細胞の増殖に見かけ上の変化はあらわれないことが判明した。この菌株における開始反応の機構は不明である。

To investigate replication initiation related to RNA detection and its effects on replication activity in E. coli. The replication activity of polA strain was determined by the efficiency, stability, and activity of polA strain in vitro replication. As a result, this is the case with mioC, which is followed by gid, which is followed by left, which is followed by right, which is followed by left, which is followed by right, which is followed by right, which is 2. To determine whether the adjustment is appropriate. For the purpose of determining the relationship between the start of replication and the model of reverse transcription, the minimum required field is included in the list, and the relationship between the location and direction of replication is discussed. OriC left hand side to right hand side to right hand side to left hand side to right hand side. The left and right sides of oriC are very low in terms of replication activity. In vivo, the R loop is formed, and the DNA is negative and the structure is negative. The gene expression of the host chromosome was determined by the gene expression of the host chromosome and the gene expression of the host chromosome. This strain is unknown.