大腸菌染色体複製開始における転写およびDnaA蛋白の機能

DnaA 蛋白在大肠杆菌染色体复制起始中的转录和功能

• 批准号: 03261207
• 负责人: 小川 徹
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03261207/
• 关键词: oriC; DNA複製; 転写; 複製開始反応; 緊縮調節

複製開始に関与するRNAを知る目的で、まず大腸菌プラスミドを用いてoriC近傍に存在するプロモ-タ-からの転写開始がプラスミドの複製能に及ぼす影響を検討した。複製能はpolA株トランスフォ-メ-ションの効率、トランスフォ-マント中でのプラスミドのコピ-数及び安定性、さらにin vitro複製反応における鋳型活性を測定することにより検定した。その結果、これまで示唆されていたmioCプロモ-タ-からの転写以上に、oriCに左接するgidプロモ-タ-からの左向きの転写が複製開始により大きく関与しており、両方の転写が協調的に寄与していることが示唆された。またこれら2つのプロモ-タ-からの転写は緊縮調節を受けていることが判明した。次に転写反応の複製開始への関与の様式を知る目的で、最少必須領域を含み、gidおよびmioCプロモ-タ-は含まないoriCとpBR322のキメラプラスミドを作成し、このプラスミドにラクト-スオペロンプロモ-タ-を挿入して、プロモ-タ-の位置および方向とプラスミドの複製能との関係を検討した。oriCの左側から左向きに進む転写が最も複製活性化に効果があり、次にoriC右外側から左向きにoriCを通過する転写が複製活性化能があることが判明した。また、oriCの左外側から右向きにoriCを通過する転写は複製活性化能が非常に低いことが判明した。in vivoでは転写はRーloop形成ではなくDNAに負の超らせん構造を与えることによりDnaAによる二本鎖開裂を引き起こすというモデルが、より妥当と考えられる。一方、宿主染色体上のgidおよびmioCの両プロモ-タ-を同時に欠失させても細胞の増殖に見かけ上の変化はあらわれないことが判明した。この菌株における開始反応の機構は不明である。

Duplicate に masato and す る RNA を know で, ま る purpose ず coliform プ ラ ス ミ ド を with い て oriC nearly exist alongside に す る プ ロ モ タ - か ら の planning to write start が プ ラ ス ミ ド の can replicate に and ぼ す influence を beg し 検 た. Can copy は polA strains ト ラ ン ス フ ォ メ - シ ョ ン の working rate, ト ラ ン ス フ ォ - マ ン ト in で の プ ラ ス ミ ド の コ ピ - number and び stability, さ ら に in vitro replication anti 応 に お け る where determination of reactive を す る こ と に よ り 検 set し た. そ の results, こ れ ま で in stopping さ れ て い た mioC プ ロ モ タ - か ら の planning to write more に, oriC に left after す る gid プ ロ モ タ - か ら の left to き の planning write が duplicate に よ り big き く masato and し て お り, struck の planning write が coordination に send し て い る こ と が in stopping さ れ た. ま た こ れ ら 2 つ の プ ロ モ タ - か ら の planning write は tightening regulation を by け て い る こ と が.at し た. Time に planning to write an 応 の duplicate へ の masato and の others type を で る purpose, must be at least area を み, gid お よ び mioC プ ロ モ タ - contains は ま な い oriC と pBR322 の キ メ ラ プ ラ ス ミ ド を し, consummate こ の プ ラ ス ミ ド に ラ ク ト - ス オ ペ ロ ン プ ロ モ タ - を scions into し て, プ ロ モ タ - の お position Youdaoplaceholder0 in the direction of とプラス, とプラス, ド, <s:1> replication can と, <s:1> related to を検, seek た. OriC の left か ら left to き に into む planning to write the most も が copy activeness に unseen fruit が あ り, に oriC right lateral か ら left to き に oriC を through す る planning can write が copy activeness が あ る こ と が.at し た. ま た, oriC の left lateral か ら right-handed き に oriC を through す る planning can write は copy activeness が very low に い こ と が.at し た. The in vivo で は planning write は R ー loop forming で は な く に DNA negative の super ら せ ん tectonic を and え る こ と に よ り DnaA に よ る 2 lock cracking を lead き up こ す と い う モ デ ル が, よ り appropriate と exam え ら れ る. One party, the host chromosome の gid お よ び mioC の struck プ ロ モ タ - を に owes lost さ せ て も cells の raised colonization に see か け の on - turn は あ ら わ れ な い こ と が.at し た. The における strain of the <s:1> strain began to reverse 応 and the structure of the 応 is unknown である.

项目成果

T.Ogawa: "Concurrent transcription from the gid and mioC promoters activates replication of an Escherichia coli minichromosome." Mo1.Gen.Genet.230. 193-201 (1991)

T.Okawa：“gid 和 mioC 启动子的同时转录可激活大肠杆菌微型染色体的复制。”

Y.Kano: "Participation of the histoneーlike protein HU and of IHF in miniーchromosomal maintenance in Escherichia coli." Gene. 103. 25-30 (1991)

Y.Kano：“组蛋白样蛋白 HU 和 IHF 在大肠杆菌基因的微型染色体维持中的参与。”