ビオチンによるエピジェネティック制御を介した免疫調節機構の解明

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1. ビオチン化ヒストン検出系の確立ビオチン化ヒストンの検出系の確立のため, マウスマクロファージ様細胞株であるJ774細胞より核画分を調整し, 塩酸抽出法によりコアヒストンを抽出した。Western blotting法による解析から, ヒストンH2A, H2B, H3およびH4の分離・抽出を確認した.そこで, この塩酸抽出画分をペルオキシダーゼ標識アビジンによるwestern blotting法で解析し、ヒストンのビオチン化を解析した.その結果, H2A, H2B, H3およびH4のいずれのコアヒストンも検出され, これらのコアヒストンのビオチン化が確認された.2. ビオチン欠乏細胞におけるビオチン化ヒストンの解析次いで、ビオチン欠乏条件下で培養したJ774細胞からコアヒストンを抽出し, そのビオチン化状態について, 正常(ビオチン充足)条件下で培養したJ774細胞由来コアヒストン抽出物と比較, 解析した. その結果, ビオチン欠乏, 充足, いずれの細胞株由来コアヒストンにおいても, 同程度のビオチン化ヒストンが検出された. また, ビオチン欠乏および充足細胞を大腸菌由来lipopolysaccharide(LPS)で刺激し, ヒストンのビオチン化を解析した. しかしながら, ビオチン欠乏/充足, LPS刺激の有無に関わらず, ヒストンのビオチン化に違いは認められなかった.以上の結果から, ベルオキシダーゼ標識アビジンによるwestern blotting法ではヒストンのビオチン化を正確に検出, 解析することが困難である可能性が示唆された. このため, 既に報告されているビオチン化ヒストン特異的モノクローナル抗体を入手するなどして, より詳細に解析を継続する必要があると考えられる.