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共生開始シグナル・イソフラボンを感知するダイズ根粒菌NodDの活性化機構

大豆根瘤菌NodD感知共生起始信号异黄酮的激活机制

基本信息

批准号：
20658019
负责人：
吉田健一
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20658019/
关键词：
ダイズ根粒菌イソフラボン共生窒素固定

项目摘要

野生ダイズ根粒菌Sinorhizobium fredii USDA191 NodD1の大腸菌内発現系によって調製したタンパク抽出物を用いてin vitro再構成する技術改善に取り組み、GroELSシャペロンニン・システムを起動させて活性化したNodDのDNA結合を首尾よく検出することに成功した。但し、未だ再現性やデータの明確さに欠けるため論文発表や学会発表にまで至ることができなかった。この点は正に挑戦萌芽研究の宿命である。NodD1の細胞内局在の観察についても、免疫電子顕微鏡による検討を続けているが未だ芳しい結果は得られていない。一方そ代案として、ウェスタンブロッティング法によりNodD1のタンパク質レベル変動を検討した結果、ダイゼイン存在下でのみ可溶性の細胞膜画分に含まれるNodD1が顕著に増加することが示唆された。しかし、ダイゼイン添加によるnodD1の転写量の変化はなかった。これらの結果から、ダイゼイン添加によって細胞膜に含まれるNodD1の増加には、mRNAの翻訳効率の上昇、あるいはNodD1の安定化が関与すると推測された。そこでNodD1活性化の途中でタンパク質の新規合成を停止しNodD1の安定性を比較したところ、ダイズイン存在下ではNodD1の分解抑制が観察された。これらの結果からNodD1活性化の過程でダイゼインが細胞膜に含まれるNodD1を安定化させその存在量を増加させることが示唆され、本年度はこの点さらに明確にすることができた。また、NodD1の多量体化をクロスリンクで検討した。NodD1が活性化した状態で結合する染色上の位置を定め、それによってNodD1の傘下にある遺伝子群を明らかにすべく、ゲルシフト・アッセイを応用したSELEX解析に挑戦した。この際は、USDA191のみならず栽培ダイズ根粒菌を代表するBradyrhizobium japonicum USDA110株についても同様の手法を適応すべく研究を進めてが、実験方法自体の設定が調わず結果を得るには至らなかった。

The Escherichia coli production system of Sinorhizobium fredii USDA191 Nodd1 was successfully modified by using vitro reconstruction technology to improve the selection and activation of Nodd DNA binding. However, there is no reproducibility and no clarity in the development of the paper and the development of the society. The point is to pick up the bud and study the fate. NodD1 is detected by electron microscopy, and the results are as follows: A method for determining the solubility of NodD1 in a cell membrane in the presence of an enzyme is described. The number of letters added to the list is 1. These results suggest that the increase of NodD1 in cell membrane, the increase of mRNA conversion rate, and the stabilization of NodD1 are related to the increase of NodD1 in cell membrane. The stability of NodD1 was compared with that of NodD1, and the decomposition inhibition of NodD1 was observed in the presence of NodD1. The results show that the process of NodD1 activation in cell membrane contains NodD1 and the presence of NodD1 in cell membrane increases. NodD1 's multi-dimensional features are discussed in detail. NodD1 is activated, the position of the dye is determined, and the position of the dye under the umbrella of NodD1 is determined. In this case, USDA191 and USDA110 strains of Bradyrhizobium japonicum were selected for the study of the same method, and the method itself was set up to adjust the results.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Daidzein transforms Sinorhizobium fredii USDA191 NodD1 into itsactivated mode with enhanced solubility and stability

大豆苷元将弗氏中华根瘤菌 USDA191 NodD1 转化为激活模式，并增强溶解度和稳定性

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yoshida;K.;et al.
通讯作者：
et al.

Daizdein transforms Sinorhizobium fredii USDA191 NodD1 into itsactivated mode : How a symbiont senses its host

大豆甙将弗雷中华根瘤菌 USDA191 NodD1 转化为激活模式：共生体如何感知其宿主

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yoshida;K.
通讯作者：
K.

Daizdein transforms Sinorhizobium fredii USDA191 NodD1 into its activated mode : How a symbiont senses its host.

大豆甙将弗雷中华根瘤菌 USDA191 NodD1 转化为激活模式：共生体如何感知其宿主。

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
TAKAHASHI;K ; SHIBATA;Y ; NANZYO;M ; KANNO;H ; TAKAHASHI;T;南條正巳(分担執筆);吉田健一
通讯作者：
吉田健一

ダイズ根粒菌Sinorhizobium fredii USDA191 NodD1は共生開始シグナル物質ダイゼインによって安定化する

大豆根瘤菌 Sinorhizobium fredii USDA191 NodD1 由共生起始信号物质大豆苷元稳定

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
高田洋平;Hari B Krishnan;芦田均;吉田健一
通讯作者：
吉田健一

DOI：
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