肝癌データベースに基づく早期肝癌特異的メチル化遺伝子の同定と機能解析

基于肝癌数据库的早期肝癌特异性甲基化基因鉴定及功能分析

• 批准号: 20659208
• 负责人: 岡 正朗
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659208/
• 关键词: 肝癌; メチル化遺伝子; エピジェネティクス; CpGアイランド; 早期診断; 定量的MSP; 網羅的解析

早期肝細胞癌において高頻度にメチル化されることが明らかとなったBASP1及びSRD5A2遺伝子のDNAメチル化率をより簡便に高精度に測定するため、メチル化特異的PCR(MSP)の条件を確立した。単一のCpGアイランド内であってもDNAメチル化率に違いがあることを見出し、最適な測定箇所を選択し組み合わせることで、感度85%・特異度91%の検出能を発揮するに至った。6種の肝癌細胞株における、BASP1及びSRD5A2遺伝子のmRNA発現レベルとDNAメチル化率の定量及び脱メチル化剤による発現誘導レベルの定量を行った。その結果、BASP1については、6細胞株中4つでDNAメチル化が認められ、その内の3つは脱メチル化剤によるmRNA発現の上昇も確認された。SRD5A2については、6細胞株中5つでDNAメチル化及び脱メチル化剤によるmRNA発現の上昇が確認された。両遺伝子のmRNA発現レベルとDNAメチル化率との間には逆相関も見られた。これらの結果から、BASP1及びSRD5A2はDNAメチル化によって発現制御されていることが示唆された。細胞株に特異的siRNAを移入することによるノックダウン系を確立した。さらに、発現ベクターを構築し細胞株に導入することで、安定強制発現株をそれぞれ確立した。前述のノックダウン・強制発現系を用いて、細胞増殖能の評価と細胞周期解析を行った。しかしながら、SRD5A2強制発現による細胞増殖能の低下が見られた以外に、ノックダウン・強制発現系における有意な影響は見られなかった。浸潤・転移能力の評価については解析が完了しなかったので、今後行っていきたい。本研究によって、BASP1及びSRD5A2遺伝子におけるDNAメチル化率をMSPによって測定することで、早期の肝細胞癌を特異的に検出することが可能となった。

To establish the conditions for DNA sequencing of BASP1 and SRD5A2 genes in early-stage hepatocellular carcinoma with high frequency and high accuracy. The sensitivity of CpG in the sample was 85%, the specificity was 91%, and the detection ability was 95%. Quantification of mRNA expression in 6 hepatoma cell lines, BASP1 and SRD5A2, and of mRNA expression in 6 hepatoma cell lines The results showed that BASP1 and BASP6 cell lines were identified by DNA sequencing and mRNA expression in BASP1 and BASP6 cell lines. SRD5A2 and SRD6 cell lines were confirmed to have increased mRNA expression due to DNA methylation and demethylation. The expression of mRNA in the gene is related to the expression of DNA. BASP1 and SRD5A2 were found to be responsible for DNA fragmentation. Cell strain specific siRNA was introduced into the system. In addition, it is necessary to establish a stable stress resistant cell line. The above mentioned stress development system can be used to evaluate cell proliferation and cell cycle analysis. SRD5A2 stress occurs when the cell proliferation activity is reduced and when the stress occurs, the cell proliferation activity is intentionally affected. Infiltration, migration, evaluation, analysis, completion, future travel In this study, we determined the DNA sequencing rate of BASP1 and SRD5A2 genes, and we found that early hepatocellular carcinoma-specific DNA sequencing was possible.

项目成果

Glycolysis module activated by hypoxia-inducible factor lalpha is related to the aggressive phenotype of hepatocellular carcinoma.

缺氧诱导因子lα激活的糖酵解模块与肝细胞癌的侵袭性表型相关。

• 发表时间: 2008
• 期刊: International Journal of Oncology 33
• 作者: Kawakami K;Ooyama A;Ruszkiewicz A;Jin M;Watanabe G;Moore J;Oka T;Iacopetta B;Minamoto T.;Hamaguchi T.
• 通讯作者: Hamaguchi T.

HCV陽性肝癌の血清メチル化マーカーとAFP, PIVKA-IIによるハイブリッド高精度診断システム

使用血清甲基化标记物、AFP 和 PIVKA-II 的 HCV 阳性肝癌混合高精度诊断系统

• 发表时间: 2008
• 作者: Jiang PH;et al.;Minamoto T;飯塚徳男
• 通讯作者: 飯塚徳男

解糖系モジュールと肝細胞癌(HCC)の進展

糖酵解模块与肝细胞癌（HCC）的发展

• 发表时间: 2008
• 作者: Minamoto T;Yamashita K;Kawakami K.;飯塚徳男
• 通讯作者: 飯塚徳男

消化器外科学レビュー2009

2009年胃肠外科评论

• 发表时间: 2009
• 作者: Tanaka T;Watanabe T;Kitayama J;et al.;Guo-Xing Zhang;Yoshiro Yoshikawa;Hiroko Matsuyoshi;Hiroko Matsuyoshi;Chikako Nakajima-Takenaka;高木都;Guo-Xing Zhang;Xiao-Mei Lu;Katsui R;Daisuke Takeshita;Yoshiaki Takewa;Shimizu J;Tsuyoshi Tsuji;Shimizu J;Takeshita D;高木都;高木都;高木都;松吉ひろ子;小畑孝二;張国興;服部宇孜;小畑孝二;松吉ひろ子;高木都;松吉ひろ子;高木都;松吉ひろ子;松吉ひろ子;高木都;Takeshi Hirano;Susumu Sakata;高木都;Shinsuke Nakayama;張国興;松吉ひろ子;張国興;松吉ひろ子;高木都;Tamura Y;武輪能明;Shimizu J;Tamura Y;Guo-Xing Zhang;竹下大輔;松吉 ひろ子;Miyako Takaki;武輪能明;高木 都;田村大和;松吉 ひろ子;Guo-Xing Zhang;松吉ひろ子;鳥本一匡;吉川義朗;高木 都;Yoshiaki Takewa;大森 斉;森若優希子;國安弘基;清水壽一郎;清水壽一郎;和田攻(分担:高木都);小澤瀞司(分担:高木都);酸素ダイナミクス研究会(分担:高木都);筏 義人;佐藤澄;Tsunedomia R;Kimura N;Moribe T;Yoshida S;Hamaguchi T.;Iida M.;Moribe T.;Iizuka N.;飯田通久;恒富亮一;飯塚徳男;飯田通久;飯田通久;恒富亮一;小川恭司;飯塚徳男;飯田通久;飯塚徳男;飯塚徳男;原田紗和子;飯塚徳男;吉村 清
• 通讯作者: 吉村 清

Relation between serum levels of cell-free DNA and inflammation status in hepatitis C virus-ralated hepatocellular careinoma.

丙型肝炎病毒相关肝细胞癌血清游离 DNA 水平与炎症状态之间的关系。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Oncology Reports 20
• 作者: Tanaka T;Watanabe T;Kitayama J;et al.;Guo-Xing Zhang;Yoshiro Yoshikawa;Hiroko Matsuyoshi;Hiroko Matsuyoshi;Chikako Nakajima-Takenaka;高木都;Guo-Xing Zhang;Xiao-Mei Lu;Katsui R;Daisuke Takeshita;Yoshiaki Takewa;Shimizu J;Tsuyoshi Tsuji;Shimizu J;Takeshita D;高木都;高木都;高木都;松吉ひろ子;小畑孝二;張国興;服部宇孜;小畑孝二;松吉ひろ子;高木都;松吉ひろ子;高木都;松吉ひろ子;松吉ひろ子;高木都;Takeshi Hirano;Susumu Sakata;高木都;Shinsuke Nakayama;張国興;松吉ひろ子;張国興;松吉ひろ子;高木都;Tamura Y;武輪能明;Shimizu J;Tamura Y;Guo-Xing Zhang;竹下大輔;松吉 ひろ子;Miyako Takaki;武輪能明;高木 都;田村大和;松吉 ひろ子;Guo-Xing Zhang;松吉ひろ子;鳥本一匡;吉川義朗;高木 都;Yoshiaki Takewa;大森 斉;森若優希子;國安弘基;清水壽一郎;清水壽一郎;和田攻(分担:高木都);小澤瀞司(分担:高木都);酸素ダイナミクス研究会(分担:高木都);筏 義人;佐藤澄;Tsunedomia R;Kimura N;Moribe T;Yoshida S;Hamaguchi T.;Iida M.
• 通讯作者: Iida M.