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体細胞核の初期化に関わるmicroRNAの機能解析

参与体细胞核重编程的 microRNA 的功能分析

基本信息

批准号：
09J03615
负责人：
小柳三千代
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J03615/
关键词：
iPS細胞 ES細胞 microRNA 体細胞の初期化レトロウイルス

项目摘要

ヒト胚性幹(ES)細胞やヒトiPS細胞は様々な細胞へと分化することができる一方で、クローン間で分化傾向に違いがあることも報告されている。我々は様々な年齢、性別のドナーの様々な組織から、いろいろな方法で49個のiPS細胞を樹立した。また、これらのiPS細胞のmicroRNAの発現、遺伝子発現、DNAのメチル化を10株のES細胞と比較した。その結果、ES細胞とiPS細胞は分子レベルで非常に似通っており、両者を完全に区別できるようなマーカーは存在しなかった。次に、このような分子レベルでのばらつきと、神経細胞への分化傾向との関連を調べた。ES/iPS細胞をSFEBq法で分化させ、分化誘導開始後14日目に初期の神経分化マーカーPSA-NCAMと未分化細胞のマーカーOCT3/4の発現をフローサイトメトリーで調べた。ほとんどのクローンが、90%以上の割合でPSA-NCAM陽性の神経細胞へと分化したが、ごくまれに未分化細胞マーカーであるOCT3/4が10%程度残っているクローンが存在した。我々は後者のクローンを"bad"クローンと定義づけ、一方で、実験を繰り返しても未分化細胞の残存率が1%を超えない細胞を"good"クローンと定義した。分化誘導を行う前に、"bad"クローンと"good"クローンが予測できるかどうかを調べるために、我々は"bad"クローンと"good"クローンの未分化状態での遺伝子発現とmiRNA発現をマイクロアレイで比較した。その結果、いくつかの分子が"bad"クローンで高く発現している傾向にあることがわかった。これらの因子を組み合わせてマーカーとして用いることができれば、臨床応用に適さない、移植後に未分化腫瘍を形成する可能性のあるクローンを分化誘導前に除去することができると期待される。現在は、これらの因子の制御機構について解析し、報告する準備をしている。

Embryonic stem (ES) cells and iPS cells differentiate into different types of cells. We have established 49 iPS cells based on age, gender and organization. The microRNA, DNA and DNA expression in iPS cells were compared with those in ES cells. The results of ES cells and iPS cells are very similar to those of cells that are completely different. In addition, the relationship between the differentiation tendency of neurons and the molecular structure of neurons is regulated. ES/iPS cell differentiation by SFEBq method, early neurodifferentiation by PSA-NCAM and development by OCT3/4 More than 90% of PSA-NCAM positive neurons were differentiated and undifferentiated. OCT3/4 was 10% residual. The survival rate of undifferentiated cells is 1% and the survival rate of undifferentiated cells is 1% Before differentiation induction takes place, the "bad" krona and the "good" krona are predicted to be adjusted, and the "bad" krona and the "good" krona are in their undifferentiated state, resulting in the discovery of genes and the discovery of miRNAs. As a result, the molecule is "bad" and the tendency is high. These factors are grouped together, used, expected, clinically appropriate, post-transplant, undifferentiated tumor formation, and removed prior to differentiation induction. Now, the regulatory body of the relevant factors is ready for analysis and reporting.