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アンチセンスRNAによる概日リズムおよび非生物的ストレス応答の制御機構の解明

反义RNA阐明昼夜节律和非生物胁迫反应的控制机制

基本信息

批准号：
10F00213
负责人：
関原明
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

環境ストレス(乾燥、低温、塩)やABA処理条件下でのタイリングアレイデータ(Matsui et al. 2008)およびSteve Kayグループの概日リズム応答に関するタイリングアレイデータ(Hazen et al. 2009)を用いてデータ解析を行った。その結果、乾燥・塩などのストレスやABAに応答し、かつ概日リズムにも応答する遺伝子の内、概日リズム応答性のアンチセンスRNAが蓄積しているものはほんの一部であった。一方で、低温ストレスと概日リズムの両方に応答する遺伝子においては、概日リズム応答性のアンチセンスRNAが蓄積するものが幾らか存在していた。その中には、低温などの環境ストレスにより誘導される遺伝子としてよく知られているRD29A遺伝子および概日リズム制御の主要な因子であるLHYおよびCCA1遺伝子が存在していた。本研究ではLHYおよびCCA1遺伝子に解析対象を絞って進めた。まず、アンチセンスRNAの概日リズム依存的な発現プロファイル検出を目指して鎖特異的なRT-PCRの条件検討およびアンチセンスRNAのクローニングを目指してRACE-PCR条件の至適化を進めた。また、近年クロマチンリモデリングが概日リズム応答の制御に関与する事が示唆されてきている。上記アレイデータを用いて概日リズムにより発現制御されるクロマチンリモデリング関与遺伝子の候補を幾つか同定した。それら遺伝子のT-DNA挿入変異株を選抜し、野生株と異なる概日リズムを有する変異体を迅速に同定するためCCA1:LUCのトランスジェニック植物系統との交配を進めた。さらに、概日リズム解析のためのクロマチン免疫沈降実験のプロトコールの至適化を行った。今後、野生株と異なる概日リズムを有する変異体を同定し、変異体におけるクロマチン動態の解析を行う予定である。

Environmental ストレス (dry, low temperature, low temperature) でのタイリングアレイデータ (Matsui et al. 2008) および Steve under ABA treatment conditions Kayグループの义日リズム応说に关するタイリングアレイデータ(Hazen et al. 2009)を用いてデータanalyticsを行った.そのRESULTS, DRY・塩などのストレスやABAに応 Answerし, かつ日リズムにも応 Answerする伝子の内、吉日リズム応 Answer性のアンチセンスRNAが综合しているものはほんの一一であった. One side, low temperature ストレスと合日リズムの両square に応 Answer する伝子においては, GH日リズム応 Answer sex のアンチセンスRNA が accumulate するものが九らかexistent していた.その中には、low temperature などのENvironment ストレスによりinducing される伝子としてよく知られているRD29 A 缝子および正日リズムcontrolのmainfactorであるLHYおよびCCA1缝子がexistent していた. This study is based on the analysis of LHY's CCA1 legacy.まず、アンチセンスRNAの日リズムdependenceな発appearsプロファイル検出を目 Refers to してLOCK-specific NART-PCR The conditions for RACE-PCR are as follows: The conditions for RNA are optimized.また, in recent years, クロマチンリモデリングが日リズム応 Answer のcontrolled に关 and する事が世敆されてきている. The above description of the アレイデータを Use the いて正日リズムにより発Now Control the Royal されるThe クロマチンリモデリングGUAN and the candidate for the surviving son are the same as the した.それら缝子のT-DNA inserted 変variant strain をselect抜し, wild strain とisoなる凯日リズムを有する変variantを Rapid に同定するためCCA1: LUC のトランスジェニック Plant system とのMATING を入めた.さらに、加日リズムanalytical のためのクロマチンimmune sedimentation 実験のプロトコールの to the appropriate を行った. From now on, there will be wild strain とdifferent となる日リズムを, there will be する変variant を同定し, 変variant におけるクロマチンDYNAMIC ANALYSIS を行うpredetermined である.