cDNAセレクション法とトランスポゾンタギング法による高等植物の機能遺伝子の単離

使用 cDNA 选择和转座子标记方法分离高等植物中的功能基因

• 批准号: 09780647
• 负责人: 関 原明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780647/
• 关键词: シロイヌナズナ; トランスポゾンタギング; Ac; Ds; ラテックス粒子; cDNAセレクション法; RD28遺伝子; Receptor-like protein kinase

cDNAスキャンニング法とトランスポゾンタギング法を組み合わせて単離した植物遺伝子の機能を解析する方法の開発に着手した。シロイヌナズナの5番染色体にDsT-DNAが挿入された親植物系統(Ds388-30)を用いてDsを転移させ、これまでに転移植物系統(1000系統)を作製した。Dsドナー部位を含む2つのYACクローン(CIC5Fll,CIC2B9)に対してcDNAスキャンニング法によりcDNAを単離した。PCRスクリーニングの結果、単離された遺伝子のreceptor-like protein kinaseのホモログ遺伝子およびシロイヌナズナのESTcDNA(T42369)と相同な遺伝子の遺伝子内部にDsが挿入した系統が選抜された。また、転移系統(200系統)よりTAIL-PCR法を用いてDsの挿入により破壊された遺伝子断片を回収し塩基配列を決定した。その結果、endoxyloglucan transferase遺伝子(EXGT-A3),actin-4遺伝子,water channel protein遺伝子(RD28)、オーキシンの抵抗性に関与するAUX1遺伝子のホモログ遺伝子,WDrepeat protein ATANllのホモログ遺伝子,PP2Aのβ'調節サブユニット遺伝子などの遺伝子内部にDsが挿入した系統が作製されていることがわかった。現在、これらの系統についてDsの挿入変異をホモにもつ個体の表現型を調べることにより破壊された遺伝子の機能解析を進めている。

Development of a method for analyzing the function of plant DNA The DsT-DNA of the five chromosomes in the genome was inserted into the parent plant system (Ds388-30), and the transplant system (1000 system) was produced. Ds position includes YAC (CIC5Fll,CIC2B9) and cDNA sequence. PCR analysis results, isolation of receptor-like protein kinases from DNA fragments and ESTcDNA(T42369) from DNA fragments of the same DNA fragments were analyzed. The TAIL-PCR method was used to determine the sequence of DNA fragments and DNA sequences in the detection of DNA fragments. Results: endoxyloglucan transferase gene (EXGT-A3),actin-4 gene,water channel protein gene (RD28), WDrespeat protein ATANl gene, WDrespeat protein ATANl gene, PP2A β 'regulatory gene, WDrespeat protein ATANl gene, WDrespeat protein ATANl gene, PP2A β' regulatory gene, WDrespeat protein ATANl gene, PP2A β 'regulatory gene, WDrespeat protein, WDrespeat protein ATANl gene, WDrespeat protein ATANl gene, PP2A β' regulatory gene, WDrespeat protein, WDrespeat protein ATANl gene, PP2A β'regulatory gene, WDrespeat protein, WDrespe Now, the system is in the process of changing the phenotype of individuals, and the function of genes is analyzed.

项目成果

Shinozaki, K.: "Molecular Responses to Water Stress in Arabidopsis thaliana" Journal of Plant Research. 111. 345-351 (1998)

Shinozaki, K.：“拟南芥对水分胁迫的分子反应”植物研究杂志。

Seki, M.: "Transient expression of foreign genes in tissues of Arabidopsis thaliana by bombardment-mediated transformation. Molecular Biotechnology(in press)" Ed.by Walker, J.M.HUMANA PRESS INC., (1999)

Seki, M.：“通过轰击介导的转化在拟南芥组织中瞬时表达外源基因。分子生物技术（印刷中）”Ed.by Walker，J.M.HUMANA PRESS INC.，（1999）

Seki,M.: "Transient expression of foreign genes in tissues of Arabidopsis thaliana by bombardment mediated transformation. Methods in Molecular Biology." Eds.by Slinas,J.and Martinez-Zapater,J.M.HUMANA PRESS INC., 7 (1997)

Seki,M.：“通过轰击介导的转化在拟南芥组织中瞬时表达外源基因。分子生物学方法。”

Ito, T.: "Regional insertional mutagenesis of genes on Arabidopsis thaliana chromosome V using the Ac/Ds transposon in combination with a cDNA scanning method" Plant Journal. (in press). (1999)

Ito, T.：“使用 Ac/Ds 转座子结合 cDNA 扫描方法对拟南芥染色体 V 上的基因进行区域插入诱变”《植物杂志》。

Shibata, D.: "Establishment of framework PI clones for map-based cloning and genome sequencing:direct RFLP mapping of large clones" Gene. 225. 31-38 (1998)

Shibata, D.：“用于基于图谱的克隆和基因组测序的框架 PI 克隆的建立：大型克隆的直接 RFLP 作图”基因。