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cDNAセレクション法による植物の形態形成および胚発生に関与する遺伝子の単離

使用 cDNA 选择方法分离参与植物形态发生和胚胎发育的基因

基本信息

批准号：
08780666
负责人：
関原明
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、これまでにラテックス粒子に共有結合したシロイヌナズナ由来のYACやコスミドクローンのDNAを用いて、cDNAを選択することにより、染色体の領域特異的なサブライブラリーを作製し、そしてそのライブラリーからcDNAを単離する方法(cDNA selection法)を開発している。本研究では、花芽形成の遅延に関与する遺伝子(fwa)、ABAのシグナル伝達に関与する遺伝子(abil)、球状胚から心臓型胚への分化に関与する遺伝子(emb20)がマッピングされた領域付近のcDNAを、cDNA selection法を用いて単離した。シロイヌナズナの第4染色体上に位置するabil遺伝子を含む領域をカバーする6個のコスミドクローンからなるコンティグを用いて実験を行った。これまでに、6個のコスミドクローンから計18種類のcDNAを単離した。その結果、これらコスミドコンティグ内に存在することがわかっていた遺伝子である、abil遺伝子、rps2遺伝子、カゼインキナーゼI遺伝子などが単離され、この方法により巨大なDNA領域内に存在するcDNAを正しく選択できることが示された。単離されたcDNAの中には、既知の遺伝子とホモロジーがないものや、また、カチオニックパーオキシダーゼ遺伝子や酵母のホスファチジルセリンデカルボキシラーゼ2遺伝子とホモロジーを有するものなど、新しい遺伝子が11個存在していた。単離された遺伝子の内、上記変異遺伝子の候補遺伝子について、アンチセンスcDNAを過剰発現させるベクターを構築し、遺伝子導入し形質転換植物(導入遺伝子の発現が抑制された変異体)の作出を進めている。その後、形質転換体での遺伝子の発現パターンおよび表現型を解析し遺伝子の機能を調べる予定である。

We have developed a method (cDNA selection method) for the production of domain-specific DNA fragments and the isolation of cDNA fragments from chromosomes. In this study, the gene related to the delay of flower bud formation (fwa), the gene related to the expression of ABA (abil), and the gene related to the differentiation of globular embryos from embryonic embryos (emb20) are among the most recent cDNA in the field and the use of cDNA selection methods. The abil gene is located on chromosome 4 of the chromosome, and the six genes are used in the field. There are 6 different cDNAs in this study, and there are 18 different cDNAs in this study. The results show that there is a cDNA sequence in the DNA domain, abil gene, rps2 gene, and the method is correct. In this study, 11 new cDNA fragments were found in the cDNA fragments of the genome, including the cDNA fragments of the genome, the cDNA fragments of the genome, and the cDNA fragments of the yeast. In addition, the candidate genes of the gene in the gene, the gene in the gene cDNA, the gene in the gene in After the transformation, the appearance of the gene and the phenotype analysis, the function adjustment of the gene are determined.