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cDNAセレクション法による植物の形態形成および胚発生に関与する遺伝子の単離

使用 cDNA 选择方法分离参与植物形态发生和胚胎发育的基因

基本信息

批准号：
08780666
负责人：
関原明
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、これまでにラテックス粒子に共有結合したシロイヌナズナ由来のYACやコスミドクローンのDNAを用いて、cDNAを選択することにより、染色体の領域特異的なサブライブラリーを作製し、そしてそのライブラリーからcDNAを単離する方法(cDNA selection法)を開発している。本研究では、花芽形成の遅延に関与する遺伝子(fwa)、ABAのシグナル伝達に関与する遺伝子(abil)、球状胚から心臓型胚への分化に関与する遺伝子(emb20)がマッピングされた領域付近のcDNAを、cDNA selection法を用いて単離した。シロイヌナズナの第4染色体上に位置するabil遺伝子を含む領域をカバーする6個のコスミドクローンからなるコンティグを用いて実験を行った。これまでに、6個のコスミドクローンから計18種類のcDNAを単離した。その結果、これらコスミドコンティグ内に存在することがわかっていた遺伝子である、abil遺伝子、rps2遺伝子、カゼインキナーゼI遺伝子などが単離され、この方法により巨大なDNA領域内に存在するcDNAを正しく選択できることが示された。単離されたcDNAの中には、既知の遺伝子とホモロジーがないものや、また、カチオニックパーオキシダーゼ遺伝子や酵母のホスファチジルセリンデカルボキシラーゼ2遺伝子とホモロジーを有するものなど、新しい遺伝子が11個存在していた。単離された遺伝子の内、上記変異遺伝子の候補遺伝子について、アンチセンスcDNAを過剰発現させるベクターを構築し、遺伝子導入し形質転換植物(導入遺伝子の発現が抑制された変異体)の作出を進めている。その後、形質転換体での遺伝子の発現パターンおよび表現型を解析し遺伝子の機能を調べる予定である。

My 々は, これまでにラテックス particle に share the combination したシロイヌナズナOrigin of YAC DNA and cDNA selection択することにより、Chromosome domain specific なサブライブラリーをし、そしてそのライブラリーからcDNAを単する method (cDNA selection method)を开発している. This study is about flower bud formation and flower bud formation. Globular embryo, heart-type embryo, differentiation and separation, cDNA (emb20), cDNA The selection method uses a simple method.シロイヌナズナのに Position on the 4th chromosome するabil 伝子をContains む domain をカバーする6のコスミドクローンからなるコンティグを用いて実験を行った.これまでに, 6 のコスミドクローンから totaling 18 types of cDNA を単里した.そのRESULT, これらコスミドコンティグ内に EXISTENCE することがわかっていた伝子である、abil 伝子、rps2伝子、カゼインキナーゼI伝子などが単里され、この法により hugeなDN The cDNA that exists in the A field is the correct one.単里されたcDNAの中には, 知の缝子とホモロジーがなYeastのホスファチジルセリンデカルボキシラーゼ2伝子とホモロジーを有するものなど、新しい伝子が11 existences していた.単里された伝子の内,上记変変俰睝の candidate addendum 伝子について, アンチセンスcDNAを剰発appearsさせるベクターをconstructed, 缝子 introduced しmorphological transformation plant (Imported 缝子の発appearが suppressed された変variant)の出入めている.その后, morphological change body での缝子の発 appear パターンおよびphenotype をanalytic し伝子のFUNCTION を Adjustment べるpredetermined である.