cDNAセレクション法による植物の形態形成および胚発生に関与する遺伝子の単離

使用 cDNA 选择方法分离参与植物形态发生和胚胎发育的基因

基本信息

批准号：
08780666
负责人：
関原明
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、これまでにラテックス粒子に共有結合したシロイヌナズナ由来のYACやコスミドクローンのDNAを用いて、cDNAを選択することにより、染色体の領域特異的なサブライブラリーを作製し、そしてそのライブラリーからcDNAを単離する方法(cDNA selection法)を開発している。本研究では、花芽形成の遅延に関与する遺伝子(fwa)、ABAのシグナル伝達に関与する遺伝子(abil)、球状胚から心臓型胚への分化に関与する遺伝子(emb20)がマッピングされた領域付近のcDNAを、cDNA selection法を用いて単離した。シロイヌナズナの第4染色体上に位置するabil遺伝子を含む領域をカバーする6個のコスミドクローンからなるコンティグを用いて実験を行った。これまでに、6個のコスミドクローンから計18種類のcDNAを単離した。その結果、これらコスミドコンティグ内に存在することがわかっていた遺伝子である、abil遺伝子、rps2遺伝子、カゼインキナーゼI遺伝子などが単離され、この方法により巨大なDNA領域内に存在するcDNAを正しく選択できることが示された。単離されたcDNAの中には、既知の遺伝子とホモロジーがないものや、また、カチオニックパーオキシダーゼ遺伝子や酵母のホスファチジルセリンデカルボキシラーゼ2遺伝子とホモロジーを有するものなど、新しい遺伝子が11個存在していた。単離された遺伝子の内、上記変異遺伝子の候補遺伝子について、アンチセンスcDNAを過剰発現させるベクターを構築し、遺伝子導入し形質転換植物(導入遺伝子の発現が抑制された変異体)の作出を進めている。その後、形質転換体での遺伝子の発現パターンおよび表現型を解析し遺伝子の機能を調べる予定である。

我们先前已经开发了一种方法，通过使用YACS和宇宙克隆的DNA选择cDNA，通过使用拟南芥Thaliana的DNA共价结合到乳胶颗粒（cDNA选择方法）来隔离区域特异性的染色体染色体。在这项研究中，在使用cDNA选择方法中分离了涉及延迟花芽形成（FWA）的基因（FWA），涉及ABA信号传导（ABIL）的基因（ABIL）的基因（ABIL）的基因（ABIL）的基因以及与分化相关的基因的基因，使用cDNA选择方法分离了从球状胚胎到心脏型胚胎（EMB20）分化的区域。实验是使用由六个宇宙克隆组成的重叠群进行的，该重叠群涵盖了含有拟南芥4染色体上的VIAL基因的区域。迄今为止，总共从六个宇宙克隆中分离出了18种类型的cDNA。结果，分离出这些宇宙基因中存在已知的基因，例如ABIL基因，RPS2基因，酪蛋白激酶I基因等，并且被分离出来，并且表明该方法可以正确选择存在巨大DNA区域中的CDNA。在分离的cDNA中，有11个新基因，包括没有已知基因同源性的基因，以及与阳离子过氧化物酶基因和酵母磷脂酰丝氨酸脱羧酶2基因同源的基因。在分离的基因中，构建了过表达突变基因候选基因的反义cDNA的载体，并引入了基因转移以产生转化的植物（其表达转基因的突变体已被抑制）。将分析转化体中的基因表达模式和表型，以检查基因的功能。