タンパク質の超高感度定量法の開発とその定量から理解する動物行動の変容

开发超灵敏蛋白质定量方法并通过其定量了解动物行为的变化

• 批准号: 21657022
• 负责人: 伊藤 悦朗
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Tokushima Bunri University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657022/
• 关键词: 行動; タンパク質; ELISA; チオNADサイクリング法; CREB; モノアラガイ; 行動学; 神経化学; 生物物理学; 脳・神経; 蛋白質

モノアラガイでの味覚嫌悪学習のキー・ニューロン内でのCREB1タンパク質の定量を試みるのが本研究の目的である。まずはその検出方法であるが、当該のタンパク質の抗体を用いたELISA法に、チオNAD酵素サイクリング法を組み合わせたものを適用し、極微量のタンパク質でも定量できるようにその測定方法の開発に努めた。サイクリング法での脱水素酵素として3α-hydroxysteroid dehydrogenaseを用い、かつ基質としては改変したandrosteroneを用いて、300回転/分以上のサイクリングを実現した。これは、androsteroneの17位を修飾することによって成功した。また酵素反応の至適条件も見直し、バッファー組成のリン酸基濃度を増やした。さらには、標識酵素としてアルカリホスファターゼまたはβガラクシダーゼのどちらを適用し、市販のプレートリーダーを用いた測定系で、10^<-20>moles/well以上の検出限界を達成できた。さて次に、CREB1タンパク質を、上述のアルカリホスファターゼを標識酵素として用いて定量してみた。しかしながら、現時点では高感度は得られておらず、行動変容に特に関与するニューロン1個内のCREB1タンパク質を定量できるまでには至っていない。問題点は、抗体の精度にあることは明らかとなったので、現在は、その抗体の精度を上げるように努めている。

The purpose of this study is to explore the quantitative analysis of CREB1 in the context of the study of taste and taste. In this paper, we try to develop a new method for the determination of trace amounts in the serum by ELISA and NAD enzyme assay. 3α-hydroxystyroid dehydrogenase is used in the production of vitamin C, vitamin C and vitamin D. The 17-bit modifier of androsterone is successful. The optimal conditions for enzyme reaction were observed, and the concentration of amino acid groups in the enzyme composition was increased. In addition, the identification enzyme and the detection limit of 10^<-20>moles/well are achieved. CREB1 is a natural enzyme. High sensitivity, high sensitivity, high The problem is that the accuracy of the antibody is not clear, and the accuracy of the antibody is not clear.

项目成果

Glutamate transporters in the central nervous system of a pond snail

池塘蜗牛中枢神经系统中的谷氨酸转运蛋白

• 发表时间: 2010
• 期刊: Journal of Neuroscience Research 88
• 作者: Hatakeyama D;Mita K;Kobayashi S;Sadamoto H;Fujito Y;Hiripi L;Elekes K;Ito E.
• 通讯作者: Ito E.

Learning-dependent gene expression of CREB1 isoforms in the molluscan brain

• DOI: 10.3389/fnbeh.2010.00025
• 发表时间: 2010-01-01
• 期刊: FRONTIERS IN BEHAVIORAL NEUROSCIENCE
• 影响因子: 3
• 作者: Sadamoto, Hisayo;Kitahashi, Takashi;Ito, Etsuro
• 通讯作者: Ito, Etsuro

新規な酵素基質とそれを用いるタンパク質および核酸の超高感度測定法

新型酶底物及使用其的蛋白质和核酸的超灵敏测量方法

• 发表时间: 2011

動物学の"進化"この10年の概念と技術の進展

动物学的“进化”：近10年概念与技术的发展

• 发表时间: 2009
• 作者: Hatakeyama D;et al.;伊藤悦朗
• 通讯作者: 伊藤悦朗

Contrary effects of octopamine receptor ligands on behavioral and neuronal changes in locomotion of Lymnaea

章鱼胺受体配体对 Lymnaea 运动的行为和神经元变化的相反影响

• 发表时间: 2010
• 期刊: Biological Bulletin 218
• 作者: Miyamae Y;Hatakeyama D;Lukowiak K;Ito E;et al.
• 通讯作者: et al.