単一細胞定量解析法によるmRNAおよびタンパク質の量的ダイナミクス計測

利用单细胞定量分析方法对mRNA和蛋白质进行定量动力学测量

• 批准号: 17657049
• 负责人: 伊藤 悦朗
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokushima Bunri University (2006)Hokkaido University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657049/
• 关键词: タンパク質定量; ELISA; 酵素サイクリング法; マイクロサンプリング; ELISA法; 抗体

本研究では、高いターンオーバー数をもつ標識酵素のELISA法と、その高感度活性測定法とを組み合わせて、タンパク質の超高感度測定法を作り上げようと試みた。そこで、まずは標識酵素の高感度活性測定法を開発した結果、従来法で最も感度の高い方法よりもさらに20倍高感度な方法に仕上がった。また本研究では、用いている抗体標識酵素が普遍的に存在するものであるため、酵素サイクリング法内にもその酵素が混在していることが明らかとなった。この混在が検出シグナルの大きなバックグランドの原因となり、検出感度(S/N)の低下をもたらすことがわかった。そのため、酵素サイクリング法に利用する酵素に含まれる標識酵素活性の除去法の開発を行った。標識酵素の自殺基質の適用により、混在酵素を除去することができた。さらには、その酵素の抗体カラムを作製し、混入酵素を除去することができた。両者とも程度の差はあるが、混入酵素の除去に役立つことがわかり、酵素サイクリング応用酵素免疫測定法が汎用に耐えるものであることが実証された。もう一つの課題である、単一細胞の単離のために、マイクロダイセクションに関する最も効率の良い手法を解析し、半自動化のマイクロサンプリングシステムを完成させた。開発した半自動化サンプリングを用いて細胞単離を行った場合、従来のマニピュレーターを用いた手動サンプリングに比べて飛躍的に短時間かつ容易に行えることが示された。

This study で は, high い タ ー ン オ ー バ ー number を も つ logo enzyme の と ELISA method, そ の Gao Gan degree of activity assay と を group み close わ せ て, タ ン パ ク qualitative の ultrahigh sensitivity measurement を made げ り よ う と try み た. そ こ で, ま ず は logo enzyme の Gao Gan degree of activity assay を open 発 し た results, 従 method で most の も sensitivity high い よ り も さ ら に 20 times Gao Gan な methods on に shi が っ た. ま た this study で は, use い て い る antibody identification enzyme が exist common に す る も の で あ る た め, enzyme サ イ ク リ ン グ method within に も そ が の enzyme in し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. Mix が こ の 検 out シ グ ナ ル の big き な バ ッ ク グ ラ ン ド の reason と な り, 検 sensitivity (S/N) low の を も た ら す こ と が わ か っ た. そ の た め, enzyme サ イ ク リ ン グ に using す に contain ま る enzyme れ る logo の enzyme activity to remove method の open 発 を line っ た. The labeled enzyme suicide substrate <s:1> is applicable to によ によ, mixed in enzyme を to remove する する とがで た た た. Youdaoplaceholder0 さらに, そ, <s:1> enzyme <s:1> antibody カラムを preparation カラムを, mixed enzyme を removal する とがで とがで た た. Who struck と も level の poor は あ る の が, mixed with enzyme to remove に servants made つ こ と が わ か り, enzyme サ イ ク リ ン グ 応 by enzyme immunoassay method が domestic に え resistant る も の で あ る こ と が card be さ れ た. も う a つ の subject で あ る, 単 a cell の 単 from の た め に, マ イ ク ロ ダ イ セ ク シ ョ ン に masato す る most も の good analytical し い gimmick を working rate, semi-automatic の マ イ ク ロ サ ン プ リ ン グ シ ス テ ム を complete さ せ た. Open 発 し た semi-automatic サ ン プ リ ン グ を with い 単 て cell line from を っ た occasions, 従 の マ ニ ピ ュ レ ー タ ー を with い た manual サ ン プ リ ン グ に than べ て leap に short time か つ line easily に え る こ と が shown さ れ た.

项目成果

Determination of the exact copy numbers of particular mRNAs in a single cell by quantitative real-time RT-PCR

• DOI: 10.1242/jeb.01625
• 发表时间: 2005-06-01
• 期刊: JOURNAL OF EXPERIMENTAL BIOLOGY
• 影响因子: 2.8
• 作者: Wagatsuma, A;Sadamoto, H;Ito, E
• 通讯作者: Ito, E

Altered gene activity correlated with long-term memory formation of conditioned taste aversion in Lymnaea

• DOI: 10.1002/jnr.21045
• 发表时间: 2006-11-15
• 期刊: JOURNAL OF NEUROSCIENCE RESEARCH
• 影响因子: 4.2
• 作者: Azami, Sachiyo;Wagatsuma, Akiko;Ito, Etsuro
• 通讯作者: Ito, Etsuro

Requirement of new protein synthesis of a transcription factor for memory consolidation: Paradoxical changes in mRNA and protein levels of C/EBP

• DOI: 10.1016/j.jmb.2005.12.009
• 发表时间: 2006-02-24
• 期刊: JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Hatakeyama, D;Sadamoto, H;Ito, E
• 通讯作者: Ito, E

De novo synthesis of CREB in a presynaptic neuron is required for synaptic enhancement involved in memory consolidation.

突触前神经元中 CREB ​​的从头合成是参与记忆巩固的突触增强所必需的。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J. Neurosci. Res. 84
• 作者: Wagatsuma A.;Azami S.;Sakura M.;Hatakeyama D.;Aonuma H.;Ito E.
• 通讯作者: Ito E.

Taste discrimination in conditioned taste aversion of the pond snail Lymnaea stagnalis.

池塘蜗牛 Lymnaea stagnalis 条件性味觉厌恶中的味觉辨别。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J.Exp.Biol. 209
• 作者: Mori;M.;Kondo;T.;Yoshida;K;D.Hatakeyama;R.Sugai
• 通讯作者: R.Sugai