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単一細胞定量解析法によるmRNAおよびタンパク質の量的ダイナミクス計測

単一細胞定量解析法によるmRNAおよびタンパク質の量的ダイナミクス計測
利用单细胞定量分析方法对mRNA和蛋白质进行定量动力学测量
批准号：
17657049
负责人：
伊藤 悦朗
金额：
$2.18万
依托单位：
Tokushima Bunri University (2006)Hokkaido University (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2005 至 2006
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657049/
关键词：
タンパク質定量ELISA酵素サイクリング法マイクロサンプリングELISA法抗体

项目摘要

项目成果

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本研究では、高いターンオーバー数をもつ標識酵素のELISA法と、その高感度活性測定法とを組み合わせて、タンパク質の超高感度測定法を作り上げようと試みた。そこで、まずは標識酵素の高感度活性測定法を開発した結果、従来法で最も感度の高い方法よりもさらに20倍高感度な方法に仕上がった。また本研究では、用いている抗体標識酵素が普遍的に存在するものであるため、酵素サイクリング法内にもその酵素が混在していることが明らかとなった。この混在が検出シグナルの大きなバックグランドの原因となり、検出感度(S/N)の低下をもたらすことがわかった。そのため、酵素サイクリング法に利用する酵素に含まれる標識酵素活性の除去法の開発を行った。標識酵素の自殺基質の適用により、混在酵素を除去することができた。さらには、その酵素の抗体カラムを作製し、混入酵素を除去することができた。両者とも程度の差はあるが、混入酵素の除去に役立つことがわかり、酵素サイクリング応用酵素免疫測定法が汎用に耐えるものであることが実証された。もう一つの課題である、単一細胞の単離のために、マイクロダイセクションに関する最も効率の良い手法を解析し、半自動化のマイクロサンプリングシステムを完成させた。開発した半自動化サンプリングを用いて細胞単離を行った場合、従来のマニピュレーターを用いた手動サンプリングに比べて飛躍的に短時間かつ容易に行えることが示された。
期刊论文(5)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Determination of the exact copy numbers of particular mRNAs in a single cell by quantitative real-time RT-PCR
DOI： 10.1242/jeb.01625
发表时间： 2005-06-01
期刊： JOURNAL OF EXPERIMENTAL BIOLOGY
影响因子： 2.8
作者： [Wagatsuma, A, Sadamoto, H, Ito, E]
通讯作者： Ito, E
Altered gene activity correlated with long-term memory formation of conditioned taste aversion in Lymnaea
DOI： 10.1002/jnr.21045
发表时间： 2006-11-15
期刊： JOURNAL OF NEUROSCIENCE RESEARCH
影响因子： 4.2
作者： [Azami, Sachiyo, Wagatsuma, Akiko, Ito, Etsuro]
通讯作者： Ito, Etsuro
Requirement of new protein synthesis of a transcription factor for memory consolidation: Paradoxical changes in mRNA and protein levels of C/EBP
DOI： 10.1016/j.jmb.2005.12.009
发表时间： 2006-02-24
期刊： JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY
影响因子： 5.6
作者： [Hatakeyama, D, Sadamoto, H, Ito, E]
通讯作者： Ito, E
De novo synthesis of CREB in a presynaptic neuron is required for synaptic enhancement involved in memory consolidation.
突触前神经元中 CREB ​​的从头合成是参与记忆巩固的突触增强所必需的。
DOI： --
发表时间： 2006
期刊： J. Neurosci. Res. 84
影响因子： --
作者： [Wagatsuma A., Azami S., Sakura M., Hatakeyama D., Aonuma H., Ito E.]
通讯作者： Ito E.
ダウン症候群に伴う急性巨核芽球性白血病発症の分子機構の解明と分子標的療法の開発
  • 批准号：
    23K21429
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $2.41万
  • 财政年份：
    2024
  • 负责人：
    伊藤 悦朗
  • 依托单位：
    Hirosaki University
ダウン症候群に伴う骨髄性白血病の分子機構の解明と分子標的療法の開発
  • 批准号：
    24K02413
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $11.81万
  • 财政年份：
    2024
  • 负责人：
    伊藤 悦朗
  • 依托单位：
    Hirosaki University
Clarification of the mechanism of multistep leukemogenesis of acute megakaryoblastic leukemia associated with Down syndrome and development of the molecular targeted therapy
  • 批准号：
    21H02877
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $11.07万
  • 财政年份：
    2021
  • 负责人：
    伊藤 悦朗
  • 依托单位：
    Hirosaki University
タンパク質の超高感度定量法の開発とその定量から理解する動物行動の変容
  • 批准号：
    21657022
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
  • 资助金额：
    $1.98万
  • 财政年份：
    2009
  • 负责人：
    伊藤 悦朗
  • 依托单位：
    Tokushima Bunri University
国内基金
海外基金
邻位诱导DNA组装协同滚环扩增赋能的ELISA技术创新及在HBsAg精准检测中的应用研究
  • 批准号：
    2026JJ82144
  • 项目类别：
    省市级项目
  • 资助金额：
    --
  • 批准年份：
    2026
  • 负责人：
    彭萍
  • 依托单位：
    长沙市中心医院
马属竞技动物疫病高通量核酸检测方法及ELISA 试剂盒的研制与口岸防控
基于生物质谱和ELISA亲和策略的微波诱导卵清蛋白致敏性降低的分子机制
  • 批准号：
    32160542
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
  • 资助金额：
    35万元
  • 批准年份：
    2021
  • 负责人：
    王辉
  • 依托单位：
    南昌大学
基于聚集诱导发光的双模态AIE-ELISA检测方法研究
  • 批准号：
    21904087
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    26.0万元
  • 批准年份：
    2019
  • 负责人：
    沈建磊
  • 依托单位：
    上海交通大学