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iPS由来の血管内皮前駆細胞を用いて新生血管を標的とする新たな免疫療法の開発

使用 iPS 衍生的内皮祖细胞开发针对新血管形成的新型免疫疗法

基本信息

批准号：
21659384
负责人：
小西郁生
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659384/
关键词：
iPS細胞血管内皮前駆細胞細胞免疫療法ケモカイン卵巣癌

项目摘要

マウスiPS細胞を理化学研究所から、LIF発現するfeeder細胞をドイツSanger研究所からそれぞれ入手し、当研究室でも未分化を保ちながら培養・増殖することに成功した。さらに、現在、ES細胞から血管前駆細胞(血管内皮細胞、血管周皮細胞、心筋細胞)に分化させることが可能とされている既報の培養条件を引用し、iPS由来血管内皮前駆細胞を作成することを最優先課題として取り組んでいる。すなわち、2008年に本学再生医学研究所から報告された本方法をもとに、一定の培養条件下でiPS細胞をfeeder細胞から分離し、血管内皮細胞用培養液(LIF不含)の中に培養細胞数の条件を振ったiPS細胞を特殊な培養皿上で分化誘導を試みている。現時点では、培養細胞の中にマウスeEPC(胚性血管内皮細胞)に類似した形態をもつ細胞が散見されるが、血管内皮前駆細胞の特異マーカーであるflk1, tie2等はフロサイトメトリー解析ではいずれも発現しておらず、分化の正確な確認は出来ていない。しかしながら条件を振った一部のiPS由来細胞の中で、初期培養から14日以上経た細胞集団の一部に拍動性の運動をするものが散見されたため、さらに7日間観察にて集団で規律を持って自働的に拍動する心筋様細胞に分化していることが判明した。すなわち、本培養法にて分化段階はまだ確定できないものの、iPS細胞を血管系へ分化誘導が可能であると期待できた。今年度以降は、より多く細胞・培養条件を見極めながら血管への分化を進めながら、さらに安定した分化誘導法を確立し、同時に分化の段階、すなわち完全に分化した血管内皮細胞までの前駆状態において形態あるいは表現型に違いがあるのかどうかを確認すること、またさらにそれらの違いによって、サイトカイン遺伝子(ケモカインリガンド19)の導入効率や、腫瘍細胞への分布率を検討していく予定である。

The iPS cells were successfully cultured in the Sanger Research Institute, where they were developed by LIF. In addition, ES cells and vascular endothelial cells (vascular endothelial cells, perivascular endothelial cells, cardiac muscle cells) can be differentiated into different culture conditions, and iPS derived vascular endothelial cells can be produced into different groups. This method was reported by the Institute of Regenerative Medicine in 2008. Under certain culture conditions, iPS cells were isolated from feeder cells, and the conditions for the number of cultured cells in culture medium for vascular endothelial cells (LIF excluded) were tested. At present, the cultured cells are similar in morphology to eEPC (embryonic vascular endothelial cells). The cells are scattered and the endothelial cells are specific. Flk 1, tie 2, etc. are analyzed and identified correctly. A part of iPS derived from cells in the early stage of culture was observed in the middle and early stage of culture. A part of iPS derived from cells in the early stage of culture was observed in the middle and early stage of culture. The differentiation stage of iPS cells can be determined by this culture method, and the differentiation of iPS cells can be expected. This year, the number of cells in culture was reduced, and the differentiation of vascular endothelial cells was further established. The differentiation induction method was established, and the differentiation stage was established. The differentiation of vascular endothelial cells was completely established. The morphology of vascular endothelial cells was confirmed. The phenotype was confirmed. The rate of introduction of tumor cells and the distribution rate of tumor cells are discussed in a predetermined manner.