In vitro und in vivo Charakterisierung der durch Topoisomerase I induzierten DNA-Reparatur

拓扑异构酶 I 诱导的 DNA 修复的体外和体内表征

• 批准号: 5392960
• 负责人: Professor Dr. Frank Große (†)
• 金额: --
• 依托单位: Leibniz-Institut für Alternsforschung - Fritz-Lipmann-Institut e.V. (FLI)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2005-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5392960?language=en
• 关键词: vitro; und; vivo; Charakterisierung; der

Humane DNA-Topoisomerase I(Topo I) erkennt eine durch genotoxischen Stress induzierte torsinale Spannung in der DNA und versucht diese durch Strangbruch und anschließende Ligation zu entfernen. Befindet sich der Schaden in unmittelbarer Nähe zur Topo I-Bindungsstelle, misslingt der Ligationsversuch und Topo I bildet einen als "suizidal" bezeichneten kovalenten Komplex mit der geschädigten DNA. Die so fixierte Topo I kann aus dem suizidalen Komplex durch ein zweites Molekül desselben Enzyms in einer von uns als "Doppelschnitt" bezeichneten Reaktion freigesetzt werden. Hierbei entsteht eine ca. 13 Nucleotide umfassende Einzelstranglücke, die als Eintrittsstelle zur rekombinativen Freisetzung des zweiten Topo I-Moleküls genutzt werden kann. Hierfür wird ein komplementärer DNA-Einzelstrang benötigt, der an seinem 5'-Ende eine freie Hydroxylgruppe tragen muss. Über diesen Weg kann Topo I prinzipiell einen rekombinativen DNA-Reparaturweg einleiten. Die durch Topo I eingeleitete rekombinativen Reparatur soll in vivo und in vitro näher untersucht werden. Weitere an dieser Reparatur beteiligte Proteinfaktoren sollen identifiziert und funktionell charakterisiert werden. Da das Tumorsuppressorprotein p53 die Doppelschnittreaktion der Topo I stark stimuliert und da sowohl p53 als auch Topo I offensichtlich an der Fehlererkennung in der lebenden Zelle beteiligt sind, soll die Rolle von p53 am vorgeschlagenen Reparaturmechanismus näher untersucht werden.

人DNA拓扑异构酶I（Topo I）通过遗传毒性应激诱导DNA的扭转性断裂，并通过Strangbrush和Anschließenal Ligation使其断裂。当沙登在Topo I-Bindungsstelle附近时，缺失的连接和Topo I形成了一个“自杀性”的复合体，它含有DNA。如此固定的拓扑结构可以通过两种分子酶在我们的“双胞胎”中进行自由反应韦尔登而形成复合体。他知道一个例子。[13]核苷酸缺失，可通过两种拓扑I分子韦尔登的重组进行。Hierfür wird ein komplementärer DNA-Einzelstrang benötigt，der an seinem 5'-Ende eine freie Hydroxylgruppe tragen muss.这条路可以让拓扑学原理重新组合DNA修复。通过拓扑结构I结合体内和体外修复可获得韦尔登。因此，蛋白质的修复需要鉴别和功能特性韦尔登。由于肿瘤抑制蛋白p53对Topo I的双重刺激作用明显，因此p53在Topo I损伤中的作用也被认为是有效的，因此p53在修复机制中的作用也将韦尔登作用。