Molekulare Mechanismen der Hepatitis C Virus-Infektion von Wirtszellen: Analyse Mittels rekombinanter HCV-E1-E2-Dengue Virus Konstrukten

丙型肝炎病毒感染宿主细胞的分子机制：使用重组 HCV-E1-E2-登革热病毒构建体进行分析

• 批准号: 5408902
• 负责人: Dr. Philip Hilgard
• 金额: --
• 依托单位: Klinik für Gastroenterologie und Hepatologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2002-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5408902?language=en
• 关键词: Molekulare; Mechanismen; der; Hepatitis; Virus

Ziel des beantragten Projektes ist es, die molekularen Mechanismen zu verstehen, durch die das Hepatitis C-Virus seine Wirtszellen erkennt, bindet und in diese Zellen aufgenommen wird. Im Rahmen unserer Vorarbeiten konnten wir zeigen, dass die initiale Bindung von Dengue Virus, einem dem HCV strukturell eng verwandten Flavivirus, an Hepatozyten über Heparansulfat-Proteoglykane vermittelt wird und von einem 'coated pit'-abhängigen endozytotischen Internalisierungsmechanismus gefolgt ist. Um diese Ergebnisse für HCV zu bestätigen, wurde ein chimärer Flavivirus konstruiert und kloniert, in welchem die Oberflächenproteine von DEN durch die E1-E2-Oberflächenproteine von HCV ersetzt wurden. Erste Ergebnisse zeigen, dass dieser chimäre Virus in Zellkultur repliziert und es zur Synthese von Viruspartikeln kommt. Damit wurde die Limitation umgangen, dass es für HCV immer noch kein Zellkultursystem gibt, mit dem alle Schritte der Virusinfektion untersucht werden können. Selbst die HCV-Replikonsysteme der zweiten Generation führen bisher nicht zur Produktion und Freisetzung von infektiösen Viruspartikeln. Nach einer detaillierten Analyse der strukturellen und biologischen Eigenschaften des chimären HCV-DEN Flavivirus soll dieser als Werkzeug zur Identifizierung HCV-bindender hepatozellulärer Membranmoleküle genutzt werden. Liganden-Blot-Analysen und Screening einer hepatozellulären Expressions-Genbibliothek mit radioaktiv merkierten Viruspartikeln sind die methodischen ansätze zur Realisierung dieses Vorhabens. Speziell entwickelte Assays zur Quantifizierung viraler Internalisierung und die Analyse verschiedener endosomaler Fraktionen mittels konfokaler Lasermikroskopie werden es dann ermöglichen, die Abfolge der initialen Infektionsschritte des chimären HCV-DEN-Flavivirus zu beschreiben.

Ziel des beantragten Projektes ist, die molecular mechanics zu versteen， and die as c -肝炎病毒seine wirtszellenerkent，结合在疾病zellenaufgenome中。在Rahmen unserer Vorarbeiten kontenwir zeigen， dass die initialdindung登革病毒，einem HCV struktreleeng verwandten黄病毒，和heozyten ber hepansulat - proteglykane vermittelt wind and von einem 'coated pit'-abhängigen endozytotischen Internalisierungsmechanismus gefoligen。Um diese Ergebnisse f<e:1> r HCV zu bestätigen， wurde ein chimärer黄病毒konstruiert und kloniert， in welchem die Oberflächenproteine von DEN durch die E1-E2-Oberflächenproteine von HCV ersetzt wurden。Ergebnisse zeigen， ass dieser chimäre病毒在zellcultur repliziert和zursynthesis von viruspartikkeln评论。Damit wurde die Limitation umgangen, dases fhcv immer noch in zellcultursystem gibt, mit le Schritte der virusinfection unsusucht werden können。研究对象：hcv -复制系统：zweiten代代技术；hcv -复制系统：hcv -复制系统；hcv -复制系统；Nach einer详细分析了HCV-DEN黄病毒的结构和生物学特性。Eigenschaften des chimären HCV-DEN黄病毒的结构和生物学特性。配体印迹分析与筛选hepatozellulären表达- genbibliothek mit radioaktiv merkierten virus . partikeln and die methodischen ansätze zur Realisierung dieses Vorhabens。spzielelentwickelt assay zzur定量分析hcv - den -黄病毒内部和死亡分析hcv - den -内质体内部和死亡分析hcv - den -内质体内部和死亡分析hcv - den -内质体内部和死亡分析lasermicroscopie werden - dann ermöglichen， hcv - den -黄病毒初次感染的Abfolge schritte des chimären hcv - den -黄病毒死亡分析。