DNA修復欠損DT40細胞を用いた抗がん剤の作用機序解明

利用DNA修复缺陷的DT40细胞阐明抗癌药物的作用机制

• 批准号: 12J05986
• 负责人: 西原 佳那
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J05986/
• 关键词: スクリーニング; DT40

DNA損傷欠損DT40細胞を用いた抗がん剤の作用機序解明のために、米国国立衛生研究所Dr. Menghang Xiaと共同研究を行った。抗がん剤は細胞のDNAに傷を入れることで細胞死を誘導する。野生型細胞は遣伝子に入った傷、すなわちDNA損傷を修復することができる。しかし、がん細胞は遺伝子に変異が入っているため、DNA損傷を修復することができない場合が多い。このため、抗がん剤に暴露された場合において、がん細胞は野生型細胞に比べて死にやすい。我々は、野生型DT40細胞とDNA損傷修復遺伝子が欠損したDT40細胞を薬剤に暴露し、両者の生存率を比較することで、薬剤のDNA毒性を評価した。以下に具体的な内容と成果を記す。我々は、昨年度に米国NIHの所有する薬剤ライブラリーの一次スクリーニングを実施した。一次スクリーニングでは野生型細胞と二種類のDNA損傷修復欠損細胞を使用した。本年度は昨年得られたデータを統計的に解析し、野生型細胞と比較してDNA損傷修復欠損細胞の生存率を優位に低下させる薬剤を選び出した。さらに得られた結果が正しいかを検証するために一次スクリーニングと同様の条件で二次スクリーニングを行った。二次スクリーニングの結果、一次スクリーニングで選ばれた薬剤のうち約半数で再現性が確認できた。これらの薬剤の中にはDNA毒性が既知のものだけでなく、過去にそのDNA毒性について報告がないものもいくつか含まれていた。また、これまでのスクリーニングで使用した二種類のDNA損傷修復欠損細胞以外に新たに六種類のDNA損傷修復欠損細胞でも同様の実験を行った。その結果、同じ薬剤に対して、すべてのDNA損傷修復欠損細胞が生存率の低下を示すわけではないことが明らかになった。このことから、薬剤が誘導したDNA損傷の種類を予測することが可能である。

DNA damage in DT40 cells by using the anti-DNA gene to explain the mechanism of action, National Institutes of Health, USA Dr. Menghang Xia Anti-cell DNA damage induced cell death. Wild-type cells are damaged by DNA damage. There are many occasions when DNA damage is repaired. This is the case with wild-type cells. We evaluated the DNA toxicity of wild-type DT40 cells by comparing the survival rate of DT40 cells exposed to DNA damage repair genes. The following specific contents and achievements are recorded. We have been implementing all of the NIH's research and development programs for the past year. One time, the wild-type cells and two kinds of DNA damage repair deficient cells were used. This year's results were statistically analyzed, compared with wild-type cells, and the survival rate of cells deficient in DNA damage repair was optimized. The results are positive and the conditions are the same. The results of the secondary search, the primary search, the selection, and the reproducibility of about half of them are confirmed. These drugs are known for their DNA toxicity, and they have been reported for their DNA toxicity in the past. In addition to two types of DNA damage repair deficient cells, six new types of DNA damage repair deficient cells were used. As a result, the survival rate of cells with defective DNA damage repair was reduced. The type of DNA damage induced by this virus is predicted.

项目成果

Identification of Genotoxic Compounds Using Isogenic DNA Repair Deficient DT40 cell lines in a Quantitative High-Throughput Screening

在定量高通量筛选中使用同基因 DNA 修复缺陷 DT40 细胞系鉴定基因毒性化合物

• 发表时间: 2014
• 作者: ◎植木亮介;山東信介;Norihide MORI';森功次;森功次;森功次;赤星聖;赤星聖・渡部正樹;赤星聖;赤星聖;Sho Akahoshi;赤星聖;Sho Akahoshi;Fujimoto Akihiro;西原 佳那
• 通讯作者: 西原 佳那

The functional analysis of homologous recombination factor, RAD51AP1, RAD54B and RAD54 by phenotypic analysis of gene-disrupted DT40 cells

通过基因破坏的 DT40 细胞的表型分析对同源重组因子、RAD51AP1、RAD54B 和 RAD54 进行功能分析

• 发表时间: 2012
• 作者: ◎植木亮介;山東信介;Norihide MORI';森功次;森功次;森功次;赤星聖;赤星聖・渡部正樹;赤星聖;赤星聖;Sho Akahoshi;赤星聖;Sho Akahoshi;Fujimoto Akihiro;西原 佳那;西原佳那
• 通讯作者: 西原佳那