クロマチン構造改変DT40細胞の系統的作成によるゲノム機能解析

通过系统生成染色质结构修饰的 DT40 细胞进行基因组功能分析

• 批准号: 12206074
• 负责人: 中山 建男
• 金额: --
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206074/
• 关键词: クロマチン構造; ヒストン; ヒストン修飾酵素; 免疫グロブリン; 細胞増殖; ジーントックアウト法

クロマチン構造は様々な要因により多様な動態をとり、ゲノムDNAの関与する多彩な機能発現を制御している。コアヒストンのアセチル化および脱アセチル化はヌクレオソーム鎖の凝縮、伸長に密接に関与している。本研究では、ジーン・ノックアウト法を用いて、アセチル基による化学修飾に関与するHATおよびHDACなどの欠損DT40変異株を系統的に作成して、次のような結果を得た。(1)chHDAC-2欠損株におけるH-chain,L-chain量の増大は、その遺伝子近傍のクロマチン構造変化を伴っている可能性があり、この構造変化を検討した。H-chain遺伝子のクロマチン構造変化は認められたが、L-chain遺伝子のクロマチン構造変化は認められなかった。また、chHDAC-2はIgM量のコントロールに際して、転写とH-chain pre-mRNAのalternative processing以外のステップでも関与している可能性がある。(2)chHDAC-3は細胞増殖に必須であるため、conditional homozygous mutantを作成した。さらに、そのN-末端領域、C-末端領域、核外輸送シグナル(NES)とデアセチラーゼ活性それ自体が必須であることを明らかにした。chHDAC-3は核の他、細胞質にも存在するため、その標的タンパク質としては、コアヒストン以外にも存在することが示唆された。(3)HATに関しては、chGCN5,chP/CAFのcDNAクローニングを終え、さらにそれぞれのホモ変異株を作成済である。また、chGCN5は細胞周期関連遺伝子の発現制御に係っている可能性がある。

The structure of the plant is important for controlling the development of multi-species DNA and multi-species functions. The connection between contraction and elongation of the complex is closely related to the transformation of the complex. In this study, the chemical modification of HAT and HDAC was carried out by using the method of chemical modification, and the results were obtained. (1)chHDAC-2 is a defective strain, and its H-chain,L-chain quantity increases, and the possibility of structural transformation in the vicinity of chHDAC-2 is discussed. H-chain gene and L-chain gene Moreover, it is possible that chHDAC-2 is involved in the production of IgM levels and is related to other mechanisms other than alternative processing of H-chain pre-mRNA. (2)chHDAC-3 cell proliferation must be completed. N-terminal domain, C-terminal domain, extra-nuclear transport (NES), and self-activity are required. chHDAC-3 is a nuclear, cytoplasmic, and molecular marker. (3)HAT related to chGCN5,chP/CAF cDNA library, the end of the day, the end of the day. The possibility of cell cycle related gene development in chGCN5 is discussed.

项目成果

Takami,Y.: "N-terminal region, C-terminal region, nuclear export signal and deacetylation activity of histone deacetylase-3 are essential for the viability of the DT40"J.Biol.Chem.. 275. 16191-16202 (2000)

Takami,Y.：“组蛋白脱乙酰酶 3 的 N 末端区域、C 末端区域、核输出信号和脱乙酰活性对于 DT40 的生存能力至关重要”J.Biol.Chem.. 275. 16191-16202 (2000

Takami,Y.: "Histone H1 variants play individual roles in transcription regulation in the DT40 chicken B cell line"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 501-508 (2000)

Takami,Y.：“组蛋白 H1 变体在 DT40 鸡 B 细胞系的转录调控中发挥各自的作用”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 501-508 (2000)

AHMAD,A.: "Leucine zipper motif of chicken histone acetyltransferase-1 is essential for in vivo and in vitro interactions with the p48 subunit of chicken chromatin"Nucleic Acids Res.. 29. 629-637 (2001)

AHMAD,A.：“鸡组蛋白乙酰转移酶 1 的亮氨酸拉链基序对于体内和体外与鸡染色质 p48 亚基的相互作用至关重要”《核酸研究》29. 629-637 (2001)

Ahmad,A.: "Distinct regions of the chicken p46 polypeptide are required for its in vitro interaction with histones H2B and H4 and histone acetyltransferase-1"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 279. 95-102 (2000)

Ahmad,A.：“鸡 p46 多肽的不同区域是其与组蛋白 H2B 和 H4 以及组蛋白乙酰转移酶-1 的体外相互作用所必需的”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 279. 95-102 (2000)