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スンクス空腹期モチリン分泌機構の解明‐約１００分周期はどのように制御されるのか‐

阐明Suncus禁食期间胃动素的分泌机制——100分钟左右的时间是如何控制的？

基本信息

批准号：
18J14399
负责人：
竹見祥大
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J14399/
关键词：
モチリン小腸オルガノイド CRISPR Suncus murinus 小腸オルガノイド Dibenzazepine

项目摘要

本研究は、空腹時に胃から下部小腸へと約100分周期で伝播する伝播性空腹期収縮（Migrating Motor Contraction; MMC）がどのように制御されるか明らかにすることを目的としており、そのために平成31年度は昨年度に引き続き、MMCの強収縮を引き起こすモチリンの転写・分泌制御機構についてスンクス小腸オルガノイドを用いて検討した。これまで、モチリンはげっ歯類では偽遺伝子化していることから研究が進んでおらず、本研究ではモチリンを産生する小型実験動物であるスンクスを用いている。これまで、スンクスで初めて小腸からオルガノイドを作製することに成功し、また安定して長期間培養することにも成功した。今年度は、モチリン産生株化細胞をスンクス小腸オルガノイドから作出するために、IRES-T antigen遺伝子をモチリン遺伝子下流にノックインすることを目的とした。IRES-T antigenを含むベクターコンストラクトを作製し、Cas9、guideRNAとともにスンクス小腸オルガノイドへトランスフェクションした。トランスフェクションしたベクター由来の蛍光タンパク質は確認できているが、未だモチリン遺伝子へのノックインは成功していない。それに加えて、蛍光レポーターであるtdTomato遺伝子をモチリン遺伝子下流にノックインするため、tdTomato遺伝子及びネオマイシン耐性遺伝子を含むベクターを作製し、guideRNA、Cas9とともにスンクス小腸オルガノイドへトランスフェクションすることも試みた。ベクターの作製は終了したが、トランスフェクションは成功していない。

In this study, the stomach, lower small intestine, and lower intestine were subjected to Migrating Motor Contract (MMC) during fasting for about 100 minutes. This study is intended to explore the use of biological diversity in small animals. This is the first time I've ever been able to do this, and I've been able to do this for a long time. This year's IRES-T antigen gene is used to produce cell lines. IRES-T antigen contains the following information: The light and quality of the origin of the essence has been confirmed, and the essence of the essence has been successfully transformed. For example, if you want to add a copy of the file, you can use the file name of the file name of the file name. If you want to add a copy of the file name of the file name, you can use the file name of the file name. The work of the system has been completed, and the system has been successfully completed.