ヒト癌オルガノイドオライブラリーを利用した治療抵抗性癌の発生・維持機構解明

利用人类癌症类器官库阐明难治性癌症的发展和维持机制

• 批准号: 21K18259
• 负责人: 佐藤 卓
• 金额: $ 16.64万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K18259/
• 关键词: ヒトがんオルガノイド; 化学療法耐性; がん幹細胞; 自己分泌; 治療抵抗性; 腫瘍内癌不均一性; ヒトがん

申請者は、独自に確立した舌がんオルガノイドライブラリーについて、実際に臨床治療に使われる、シスプラチンに対する感受性を検討し、これらのうち3症例の患者由来の舌がんオルガノイド株がシスプラチン耐性舌がん細胞を、相対的に多く含むことを見出している。また、これらのシスプラチン耐性舌がん細胞の網羅的遺伝子発現データから、複数（11種）の分泌因子の発現が、同がん細胞において特徴的に濃縮されていることを見出している。昨年度の研究において、当該分泌因子のうち分子Xに着目し、シスプラチンと分子X阻害剤をオルガノイド培養系に併用添加することで、シスプラチン耐性舌がん細胞の生存を有意に抑制することができた。一方、シスプラチン耐性舌がんオルガノイド株において、レンチウイルスベクター系を用いたノックダウンオルガノイド株を作製したが、分子Xのノックダウンによるシスプラチン感受性亢進はごくわずかでり、shRNAによるノックダウン効率が不十分であることによる可能性が想定された。そこで、本年度は、CRISPR/Cas9システムによる標的遺伝子ノックアウトオルガノイド系の確立を試みた。本年度は、各症例の化学療法剤耐性オルガノイドにおいてドキシサイクリン誘導性Cas9発現株を樹立した。一方、昨年度までに樹立した食道扁平上皮がんオルガノイドについて化学療法剤感受性を評価し、これまでに複数の化学療法剤感受性の低いオルガノイド株を得た。また、これらについて、遺伝子変異解析、遺伝子発現解析を実施し、現在、これらに特徴的に発現されるな分泌因子を探索している。

The applicant shall independently establish the relationship between the patient's origin and the patient's susceptibility to the disease in clinical treatment, and the relationship between the patient's origin and the patient's tolerance to the disease. The expression of multiple (11 kinds) secreted factors and the concentration of characteristics of the cells were also observed. In the past year's study, when the secretion factor of all molecules X and molecular X inhibitor in the culture system and add to the culture system, the expression of all molecules X and molecular X inhibitor in the culture system intentionally inhibited the survival of the cells. The possibility of increasing the sensitivity of molecule X to shRNA is determined by the possibility that the rate of shRNA resistance is not very high. This year, CRISPR/Cas9 will try to establish the target system. This year, chemotherapy resistance in various cases was established. In the past year, the esophageal squamous epithelium was established, and the sensitivity of chemotherapy agents was evaluated. The analysis of gene expression, gene mutation, gene expression, gene secretion, gene expression, gene