ヒト癌オルガノイドオライブラリーを利用した治療抵抗性癌の発生・維持機構解明

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申請者は、独自に確立した舌がんオルガノイドライブラリーについて、実際に臨床治療に使われる、シスプラチンに対する感受性を検討し、これらのうち3症例の患者由来の舌がんオルガノイド株がシスプラチン耐性舌がん細胞を、相対的に多く含むことを見出している。また、これらのシスプラチン耐性舌がん細胞の網羅的遺伝子発現データから、複数（11種）の分泌因子の発現が、同がん細胞において特徴的に濃縮されていることを見出している。昨年度の研究において、当該分泌因子のうち分子Xに着目し、シスプラチンと分子X阻害剤をオルガノイド培養系に併用添加することで、シスプラチン耐性舌がん細胞の生存を有意に抑制することができた。一方、シスプラチン耐性舌がんオルガノイド株において、レンチウイルスベクター系を用いたノックダウンオルガノイド株を作製したが、分子Xのノックダウンによるシスプラチン感受性亢進はごくわずかでり、shRNAによるノックダウン効率が不十分であることによる可能性が想定された。そこで、本年度は、CRISPR/Cas9システムによる標的遺伝子ノックアウトオルガノイド系の確立を試みた。本年度は、各症例の化学療法剤耐性オルガノイドにおいてドキシサイクリン誘導性Cas9発現株を樹立した。一方、昨年度までに樹立した食道扁平上皮がんオルガノイドについて化学療法剤感受性を評価し、これまでに複数の化学療法剤感受性の低いオルガノイド株を得た。また、これらについて、遺伝子変異解析、遺伝子発現解析を実施し、現在、これらに特徴的に発現されるな分泌因子を探索している。