T細胞非依存性免疫応答と細胞内分解

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肺炎球菌莢膜多糖などの多糖への抗体産生は感染防御に重要である。タンパク質抗原への抗体産生とは異なり、多糖への抗体産生はT細胞によるヘルプなしにおこるが、そのメカニズムは不明である。ニトロフェノール(NP)に特異的なBCRを発現するB細胞をNP化したタンパク質抗原で刺激してもB細胞は活性化しない。しかし、デキストランなどの多糖抗原をNP化し、NP特異的なB細胞と培養すると、B細胞は活性化・増殖する。BCRが抗原と反応するとBCRを介するシグナル伝達がおこるとともに、抗原は細胞内に取り込まれる。取り込まれたタンパク質抗原は速やかにリソソームで分解されるが、多糖は長時間分解されずに後期エンドソーム／リソソームにとどまることを明らかにした。細胞内で長時間保持される抗原が多糖抗原によるT細胞非依存的なB細胞応答に関わるかを明らかにするために、リソソームタンパク質であるカテプシンBとデキスラナーゼの融合タンパク質をコードするcDNAをCreリコンビナーゼ依存的に発現するDNAフラグメントをROSA26遺伝子座に挿入するためのターゲットベクターを作製し、CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集によりマウスの作出を行なった。インジェクションと得られた産仔のスクリーニングを繰り返し、カテプシンB-デキストラナーゼ遺伝子がROSA26遺伝子座に挿入された組み換えマウスを得ることができた。さらに、カテプシンB-デキストラナーゼノックインマウスをタモキシフェンでCreが活性化するCreERT2マウスと交配したマウスを作製した。