遺伝子導入マウスを用いたT細胞によるB細胞補助、胚中心形成反応の分子機構の研究-CD40/CD40L系及びbc12の機能の解析-

利用转基因小鼠研究T细胞辅助B细胞和生发中心形成反应的分子机制 - CD40/CD40L系统和bc12的功能分析 -

• 批准号: 06670348
• 负责人: 鍔田 武志
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670348/
• 关键词: Bリンパ球; CD40; CD40L; トランスジェニックマウス; オートクライン; 分化; SRαプロモーター; IgHエンハンサー

我々は、B細胞抗原CD40を介するシグナルが恒常的にB細胞に伝達されるようなマウスを樹立することを目的とし、CD40のリガンドCD40L遺伝子の発現プラスミドを二つ作製した。一つはSRαプロモーターを、もう一つはIgHエンハンサーとVHプロモーターをもつ。この両者をミエローマ細胞株X63Ag 8.653に導入したところ、共に細胞表面でのCD40L分子の発現が抗CD40L抗体を用いて検出でき、また、B細胞株WEHI-231と共培養するとWEHI-231の抗原レセプタークロスリンクによるアポトーシスを阻害した。さらに、WEHI-231細胞に導入すると導入された細胞はもはや抗原レセプタークロスリンクによってアポトーシスをおこさなくなった。従ってこれらのCD40L遺伝子を導入したB細胞では、オートクライン機構によりCD40シグナルが恒常的に誘導されるものと考えられる。我々はこれらの2種のCD40Lプラスミドを用い、トランスジェニックマウスの樹立を行なった。SRαプロモーターにより制御されるCD40L遺伝子のトランスジェニックマウスではトランスジーンの存在は確認され、ノーザン解析ではその発現を確認できたが、フローサイトメトリーではCD40L分子の細胞表面への発現は検出できず、CD40Lの発現は低レベルにとどまっているものと考えられた。しかしながら組織学的な検索では脾臓では特に異常はみられなかったもののリンパ節でプラズマ細胞の著明な増生を認め、CD40LがB細胞の分化で重要な役割を果たすことが示唆された。一方、IgHエンハンサーにより制御されるCD40L遺伝子を導入したトランスジェニックマウスではF1を得ることができず、その原因は現在検索中である。

I 々 は, B cell antigen CD40 を interface す る シ グ ナ ル が constant に B cells に 伝 da さ れ る よ う な マ ウ ス を set す る こ と を purpose と し, CD40 の リ ガ ン ド CD40L heritage 伝 son の 発 now プ ラ ス ミ ド を 2 つ cropping し た. A つ は SR alpha プ ロ モ ー タ ー を, も う a つ は IgH エ ン ハ ン サ ー と VH プ ロ モ ー タ ー を も つ. The two are を, エロ, エロ, cell lines X63Ag 8.653 に import し た と こ ろ, に cell surface で の CD40L molecules の 発 now が CD40L antibody を resistance with い て 検 out で き, ま た, B cell lines WEHI - 231 と trained す る と の WEHI - 231 antigen レ セ プ タ ー ク ロ ス リ ン ク に よ る ア ポ ト ー シ ス を resistance against し た. さ ら に, WEHI - 231 cells に import す る と import さ れ た cells は も は や antigen レ セ プ タ ー ク ロ ス リ ン ク に よ っ て ア ポ ト ー シ ス を お こ さ な く な っ た. 従 っ て こ れ ら の CD40L posthumous son 伝 を import し た B cells で は, オ ー ト ク ラ イ ン institutions に よ り CD40 シ グ ナ ル が constant に induced さ れ る も の と exam え ら れ る. I 々 は こ れ ら の two の CD40L プ ラ ス ミ ド を い, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の line set を な っ た. SR alpha プ ロ モ ー タ ー に よ り suppression さ れ る CD40L posthumous son 伝 の ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス で は ト ラ ン ス ジ ー ン の exist は confirm さ れ, ノ ー ザ ン parsing で は そ の 発 を now confirmed で き た が, フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー で は CD40L molecules の cell surface へ の 発 now は 検 out で き ず, CD40L の 発 は now The lower レベ る にと まって まって る る と と test えられた. し か し な が ら histological な 検 cable で は splenic で は, abnormal に は み ら れ な か っ た も の の リ ン パ section で プ ラ ズ マ cells の zhao Ming な raised を recognize め, CD40L が B cells の で important な "を cut fruit た す こ と が in stopping さ れ た. Party, IgH エ ン ハ ン サ ー に よ り suppression さ れ る CD40L heritage 伝 son を import し た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス で は F1 を must る こ と が で き ず, そ の reason は now 検 cable で あ る.

项目成果

Tsubata,T.,Murakami,M.,Nisitani,S.and Honjo,T.: "Molecular mechanisms for B lymphocyte selection induction and regulation of antigen receptor-mediated apoptosis of mature B cells in normal mice and their defect in autoimmunity-prone mice." Proc.R.Soc.Lond

Tsubata，T.，Murakami，M.，Nisitani，S. 和 Honjo，T.：“正常小鼠中 B 淋巴细胞选择诱导和抗原受体介导的成熟 B 细胞凋亡的分子机制及其在自身免疫倾向中的缺陷

Tsubata,T.,Murakami,M.,Honjo,T.: "Antigen receptor cross-linking induces peritoneal B-cell apoptosis in normal but not autoimmunity-prone mice." Current Biology. 4. 8-17 (1994)

Tsubata,T.、Murakami,M.、Honjo,T.：“抗原受体交联会诱导正常小鼠腹膜 B 细胞凋亡，但不会诱导自身免疫性小鼠发生凋亡。”

Nisitani,S.,Tsubata,T.,Honjo,T.: "Lineage marker-negative lymphocyte precursors derived from embryonic stem cells in vitro differentiate into mature lymphocytes in vivo." International Immunology. 6. 909-916 (1994)

Nisitani,S.、Tsubata,T.、Honjo,T.：“源自胚胎干细胞的谱系标记阴性淋巴细胞前体在体外分化为体内成熟的淋巴细胞。”

Murakami,M.,Tsubata,T.,Shinkura,R.,Nisitani,S.,et al.: "Oral administration of lipopolysaccharides activates B-1 cells in the peritoneal cavity and the lamina propria of the gut and induces autoimmune symptoms in an autoantibody transgenic mouse." Journal

Murakami,M.,Tsubata,T.,Shinkura,R.,Nisitani,S.,et al.：“口服脂多糖可激活腹膜腔和肠道固有层中的 B-1 细胞，并诱导自身免疫症状