がん細胞の浸潤転移を制御するダイナミンクロスブリッジ機構の解析

控制癌细胞侵袭和转移的动力跨桥机制分析

• 批准号: 22K06580
• 负责人: 阿部 匡史
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06580/
• 关键词: ダイナミン; アクチン; がん; 微小管; 仮足; 浸潤; 走化

本研究は、がん細胞における仮足形成に必須であるアクチン及び微小管の再構成機構（ダイナミンクロスブリッジ）を明らかにする。本年度は、in vitro解析法を駆使してダイナミン２野生型、K562E、K562delta変異体によるアクチン線維束を電子顕微鏡にて観察し、クライオ電子顕微鏡による構造解析に向けた試料調製条件の最適化を試みた。ダイナミン２タンパクは、コムギ胚芽無細胞タンパク合成系を用いて調製した。アクチン線維束の観察は、負染色後、透過型電子顕微鏡を用いて行なった。ダイナミン２野生型により形成されたアクチン線維束は、１個あたり幅が約50nmで、K562E及びK562deltaにより形成されたアクチン線維束と同様であった。しかし、ダイナミン２野生型により形成されたアクチン線維束は、別の複数の線維束とともに、さらに束化していた。K562E及びK562delta変異体により形成されたアクチン線維束は、野生型のものと比べて顕著に再束化するアクチン線維が少なかった。そのため、ダイナミン２野生型を用いたアクチン線維束は、クライオ電子顕微鏡観察に不適であることが判明した。以降、K562EまたはK562delta変異体を用いたアクチン線維束を構造解析に使用することになった。また、クライオ電子顕微鏡観察する場合には、試料の濃度を高くする必要がある。しかしながら、ダイナミン２は、濃度の高い状態では、凝集しやすいため、条件のさらなる検討が必要になった。次年度には、分散したアクチン線維束の形成を高濃度に得る条件を探し出し、クライオ電子顕微鏡観察に備えたスクリーニングを行う予定である。

は, this study が ん cells に お け る 仮 foot form に must で あ る ア ク チ ン and び の to constitute a tiny tube institutions (ダ イ ナ ミ ン ク ロ ス ブ リ ッ ジ) を Ming ら か に す る. は this year, in vitro analytical method を 駆 make し て ダ イ ナ ミ ン 2 wild type, K562E, K562delta - variant に よ る ア ク チ ン line d を electron beam 顕 micromirror に て 観 し, ク ラ イ オ electronic 顕 micromirror に よ る structure に to け た try material optimal modulation conditions の を み た. ダ イ ナ ミ ン 2 タ ン パ ク は, コ ム ギ germ cell free タ ン パ ク GeChengXi を with い て modulation し た. Youdaoplaceholder0, チ, チ, <s:1> filament beam microscopy 観 examination, negative staining, transmissive electron 顕 microscope を, て て line なった. ダ イ ナ ミ ン 2 wild type に よ り form さ れ た ア ク チ ン line 1 d beam は, あ た り が picture about 50 nm で, K562E and び K562delta に よ り form さ れ た ア ク チ ン line d と beam with others で あ っ た. し か し, ダ イ ナ ミ ン 2 wild type に よ り form さ れ た ア ク チ ン line d beam は, don't の plural の line d beam と と も に, さ ら に beam is changed し て い た. K562E and び K562delta - variant に よ り form さ れ た ア ク チ ン line type d beam は, wild の も の と than べ て 顕 the に beam is changed again す る ア ク チ ン line d が less な か っ た. そ の た め, ダ イ ナ ミ ン 2 wild type を with い た ア ク チ ン line d beam は, ク ラ イ オ electronic 顕 micromirror 観 examine に discomfort で あ る こ と が.at し た. To drop and K562E ま た は K562delta - variant を with い た ア ク チ ン line d を beam structure に use す る こ と に な っ た. ま た, ク ラ イ オ electronic 顕 micromirror 観 examine す る occasions に は, try の high concentration を く す る necessary が あ る. し か し な が ら, ダ イ ナ ミ ン 2 は state, high concentration の い で は, agglutination し や す い た め, conditions の さ ら な る beg が 検 necessary に な っ た. Annual に は, scattered し た ア ク チ ン line d の beam forming を high-concentration に を explore し out し る conditions, ク ラ イ オ electronic 顕 micromirror 観 examine に prepared え た ス ク リ ー ニ ン グ を line う designated で あ る.

项目成果

1.脂質膜結合活性が低下しているダイナミン２のCMT変異体は、ポドサイトにおけるアクチン線維の配向とアクチンバンドル形成を異常にする

1. 动力蛋白 2 的 CMT 突变体具有降低的脂膜结合活性，使足细胞中的肌动蛋白纤维方向和肌动蛋白束形成异常。

• 发表时间: 2022
• 作者: 山田浩司;阿部匡史;内橋貴之;成田哲博;竹田哲也;竹居孝二
• 通讯作者: 竹居孝二