SNAP-25のリン酸化がストレス反応機構において果たす役割の解明

阐明 SNAP-25 磷酸化在应激反应机制中的作用

基本信息

批准号：
22K07601
负责人：
山森早織
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

心的外傷後ストレス障害（PTSD）では、強いストレスに直面した後に、その恐怖記憶が繰り返し想起され心身の疲弊が生じる。PTSDの発症機構は十分には解明されておらず、恐怖記憶の保持に関わる機構を明らかにすることは大きな課題となっている。本研究では、強いストレスにより脳内で誘導されるSNAP-25のリン酸化の意義と行動への影響を解明することを目指す。これまでに身体的あるいは心理的な、強いストレスによりマウスの脳の特定の領域でSNAP-25のSer187のリン酸化が上昇することを明らかにしている。令和４年度は、①強いストレスによりSNAP-25のリン酸化を生じるシナプス伝達経路について解析を行った。リン酸化SNAP-25抗体および、各神経伝達物質を放出するニューロンのマーカー分子の抗体を用いて、強いストレスを受けたマウスの脳の蛍光二重染色を行い、リン酸化の誘導に関与する可能性のある神経伝達物質を特定した。さらに、マウスの脳室内に、候補となる神経伝達物質を生体内濃度で投与して脳内のSNAP-25のリン酸化の変化を解析した。また、②SNAP-25のリン酸化による種々の神経伝達物質の放出の制御について解析を行った。脳より調整したシナプトソームを用い、神経伝達物質の放出能の差を解析するシステムの構築には成功した。野生型マウスのベースのSNAP-25のリン酸化は低いため、プロテインキナーゼＣの活性化剤を併用してSNAP-25のリン酸化を上昇させ、野生型マウスとSNAP-25非リン酸化型のノックインマウスの比較を試みたところ、数種の薬剤を検討したが膜の透過性に影響が生じることが明らかになった。そのため、SNAP-25恒常的リン酸化型のノックインマウスの作成を開始し、このマウスを利用して目的を達成するよう計画を変更した。

在创伤后应激障碍（PTSD）中，恐惧的记忆在面对强烈的压力后反复召回，导致精神和身体疲惫。 PTSD发作的机制尚未完全理解，这是阐明保留恐惧记忆的机制的主要挑战。这项研究旨在阐明由于剧烈的压力，大脑引起的SNAP-25磷酸化的重要性和行为影响。到目前为止，我们已经表明，强烈的身体或心理压力会增加小鼠大脑某些区域SNAP-25中Ser187的磷酸化。在2022财年中，1）在突触传输途径上进行了分析，该突触传播途径导致SNAP-25磷酸化，这是由于强烈的压力。使用释放每个神经递质的神经元标记分子的磷酸化SNAP-25抗体和抗体，我们对高应激小鼠的大脑进行了荧光双重染色，以鉴定可能参与诱导磷酸化的神经递质。此外，将候选神经递质的体内浓度施用到小鼠脑室内小鼠中，以分析大脑中SNAP-25磷酸化的变化。还对通过SNAP-25的磷酸化来调节各种神经递质的释放进行了分析。我们已经成功构建了一个系统，该系统使用脑调节的突触体分析神经递质释放能力的差异。由于SNAP-25基于野生型小鼠的磷酸化低，因此使用蛋白激酶C活化剂来增加SNAP-25的磷酸化，并且当我们试图将野生型小鼠与Snap-25非磷酸化小鼠进行比较时，我们调查了几种药物，并发现了几种药物，并揭示了验证了Membreans的影响。因此，我们开始使用SNAP-25的组成型磷酸化创建一个敲入小鼠，并更改了使用该鼠标实现其目标的计划。