SNAP-25のリン酸化がストレス反応機構において果たす役割の解明

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心的外傷後ストレス障害（PTSD）では、強いストレスに直面した後に、その恐怖記憶が繰り返し想起され心身の疲弊が生じる。PTSDの発症機構は十分には解明されておらず、恐怖記憶の保持に関わる機構を明らかにすることは大きな課題となっている。本研究では、強いストレスにより脳内で誘導されるSNAP-25のリン酸化の意義と行動への影響を解明することを目指す。これまでに身体的あるいは心理的な、強いストレスによりマウスの脳の特定の領域でSNAP-25のSer187のリン酸化が上昇することを明らかにしている。令和４年度は、①強いストレスによりSNAP-25のリン酸化を生じるシナプス伝達経路について解析を行った。リン酸化SNAP-25抗体および、各神経伝達物質を放出するニューロンのマーカー分子の抗体を用いて、強いストレスを受けたマウスの脳の蛍光二重染色を行い、リン酸化の誘導に関与する可能性のある神経伝達物質を特定した。さらに、マウスの脳室内に、候補となる神経伝達物質を生体内濃度で投与して脳内のSNAP-25のリン酸化の変化を解析した。また、②SNAP-25のリン酸化による種々の神経伝達物質の放出の制御について解析を行った。脳より調整したシナプトソームを用い、神経伝達物質の放出能の差を解析するシステムの構築には成功した。野生型マウスのベースのSNAP-25のリン酸化は低いため、プロテインキナーゼＣの活性化剤を併用してSNAP-25のリン酸化を上昇させ、野生型マウスとSNAP-25非リン酸化型のノックインマウスの比較を試みたところ、数種の薬剤を検討したが膜の透過性に影響が生じることが明らかになった。そのため、SNAP-25恒常的リン酸化型のノックインマウスの作成を開始し、このマウスを利用して目的を達成するよう計画を変更した。