タンパク質リン酸化を選択的に認識する化学プローブの創製

创建选择性识别蛋白质磷酸化的化学探针

• 批准号: 11J06795
• 负责人: 秋葉 宏樹
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J06795/
• 关键词: 希土類錯体; チロシンリン酸化; 蛍光・発光プローブ; バイオコンジュゲーション

本研究課題においては、Tb(III)錯体を利用して、タンパク質におけるチロシンリン酸化の直接可視化を目指した研究を行ってきた。当該年度においては、1.阻害剤の機能可視化による創薬への貢献を目指した展開、2.基質へのコンジュゲーションによる検出系の応用拡大、3.認識メカニズムの解明、という3点について研究を進めた。1.阻害剤の機能可視化前年度の段階においてチロシンキナーゼSrcの活性に対する阻害剤staurosporineの影響を可視化することに成功していたが、本年度においては幅広い酵素、阻害剤の組み合わせについてそれらを可視化し定量的に比較することに成功した。さらに、キナーゼと相補的に働くフォスファターゼの働き、フォスファターゼに対する阻害剤の効果をも可視化、定量することができた。既存の手法と比較してもよいシグナル/ノイズ比が得られることから、新規の阻害剤の評価系として発展させるうえで非常に有望な手法の1つであるといえる。2.コンジュゲーションによる検出系の拡大Huisgen環化付加反応によって基質にコンジュゲーションすることのできるTb(III)錯体Tb_2-Lclyneを合成した。基質ペプチドとしては、より反応観察に適切であるAbltideを用い、Ablによる反応を可視化することとした。コンジュゲーション反応とコンジュゲートペプチド精製の最適化を行ったところ、リン酸化反応に従って大幅に発光強度が増大する系を構築することに成功した。従来のTb_2-L^1では可視化できなかったターゲットも可視化できたことから、検出系の拡大に寄与する結果となった。3.認識メカニズムの解析リン酸化TyrのモデルであるPhOPと比較的強く相互作用するTb(III)複核錯体Tb_2-L^1を用い、エネルギー伝達効率を求めることで、フェノール部位とTb(III)イオンとの距離が7.64Åと決定された。これは、リン酸部位が2つのTb(III)イオンと、それぞれ水1分子を介して相互作用するモデルとよく一致する。このことから、Tb2-L1の2つのTb(III)イオンが協同的に作用することが示唆された。

This research topic に お い て は, Tb (III) misprinted を using し て, タ ン パ ク qualitative に お け る チ ロ シ ン リ ン acidification の direct visualization を refers し た を line っ て き た. When the year にお にお て て て て, 1. Visualization of the <s:1> function of the inhibitor による drug creation へ <s:1> contribution を target finger <s:1> た unfolded, 2. Matrix へ の コ ン ジ ュ ゲ ー シ ョ ン に よ る 検 out is の 応 with big company, (3) understanding メ カ ニ ズ ム の uttered, と い う 3 に つ い を て research into め た. Year before resistance against tonic の function visualization の Duan Jie に お い て チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ Src の active に す seaborne る resistance against tonic staurosporine の influence を visualization す る こ と に successful し て い た が, this year's に お い て は picture hiroo い enzyme, resistance against tonic の group み わ せ に つ い て そ れ ら を visualization し quantitative に compare す る こ と Youdaoplaceholder0 success た. さ ら に, キ ナ ー ゼ と phase of に 働 く フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ の 働 き, フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ に す seaborne る resistance against tonic の unseen fruit を も visualization and quantitative す る こ と が で き た. Existing の gimmick と compare し て も よ い シ グ ナ ル / ノ イ ズ が than ら れ る こ と か ら, new rules の resistance against tonic の review 価 department と し て 発 exhibition さ せ る う え で very に could な gimmick の 1 つ で あ る と い え る. 2. コ ン ジ ュ ゲ ー シ ョ ン に よ る 検 out is の company, plus the large Huisgen cyclization 応 に よ っ て matrix に コ ン ジ ュ ゲ ー シ ョ ン す る こ と の で き る Tb (III) misprinted Tb_2 - Lclyne を synthetic し た. Matrix ペ プ チ ド と し て は, よ り anti 応 観 examine に appropriate で あ る Abltide を い, Abl に よ る anti 応 を visualization す る こ と と し た. コ ン ジ ュ ゲ ー シ ョ ン anti 応 と コ ン ジ ュ ゲ ー ト ペ プ チ ド refined の line optimization を っ た と こ ろ, リ ン acidification anti 応 に 従 っ て sharply に 発 light intensity が raised large す る department を build す る こ と に successful し た. 従 to の Tb_2 - L ^ 1 で は visualization で き な か っ た タ ー ゲ ッ ト も visualization で き た こ と か ら, 検 is の company, big に send す る results と な っ た. 3. Know メ カ ニ ズ ム の parsing リ ン acidification Tyr の モ デ ル で あ る PhOP と compare strong く interactions す る Tb (III) review misprinted Tb_2 - L ^ 1 を い, エ ネ ル ギ ー を 伝 da working rate for め る こ と で, フ ェ ノ ー ル parts と Tb (III) イ オ ン と が の distance 7.64 A と decided さ れ た. こ れ は, リ ン acid part 2 つ が の Tb (III) イ オ ン と, そ れ ぞ れ 1 water molecules を interface し て interaction す る モ デ ル と よ く consistent す る. The synergistic に effect of <s:1> と ら ら and Tb2-L1 <s:1> 2 された <s:1> Tb(III) <s:1> and <s:1> が が が indicates する とが とが とが incites された.

项目成果

Tb(III)錯体のコンジュゲーションによるタンパク質上の特定Tyr 残基リン酸化の検出

通过缀合 Tb(III) 复合物检测蛋白质上特定 Tyr 残基的磷酸化

• 发表时间: 2012
• 作者: 秋葉宏樹;須磨岡淳;小宮山眞
• 通讯作者: 小宮山眞

チロシン残基のリン酸化を検出するTb(III)錯体－アミノ酸からペプチド・タンパク質への展開－

检测酪氨酸残基磷酸化的Tb(III)复合物 - 从氨基酸到肽和蛋白质的发展 -

• 作者: 秋葉宏樹;須磨岡淳;小宮山眞
• 通讯作者: 小宮山眞

チロシン残基のリン醒化を検出するTb(III)錯体-アミノ酸からペプチド・タンパク質への展開-

检测酪氨酸残基磷酸化的Tb(III)复合物 -从氨基酸到肽和蛋白质的发展-

• 发表时间: 2012
• 作者: 秋葉宏樹; 須磨岡淳; 小宮山眞
• 通讯作者: 小宮山眞

Tb(III)錯体によるチロシンキナーゼ阻害剤評価法の確立

Tb(III)络合物评价酪氨酸激酶抑制剂方法的建立

• 发表时间: 2012
• 作者: 秋葉宏樹;須磨岡淳;津本浩平;浜窪隆雄;小宮山眞
• 通讯作者: 小宮山眞

Tb(III)錯体によるリン酸化Tyr検出法におけるリン酸認識メカニズム

Tb(III) 络合物磷酸化 Tyr 检测方法中的磷酸盐识别机制

• 发表时间: 2011
• 作者: 秋葉宏樹;須磨岡淳;小宮山眞
• 通讯作者: 小宮山眞