RNAｉでの脳水チャネル調節と低酸素プレコンディショニングによる脳神経保護効果

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アクアポリン（AQP）Knockdownとover-expression細胞株の確立と並行して低酸素負荷でのカテコラミンサージのβブロッカーの効果発現の実験を行なった。また低酸素プレコンディショニングの条件確立を試みた。低酸素負荷後に細胞状態を低酸素チャンバーで再検討した。プレコンディショニングの条件として、15％酸素、10％酸素、5％酸素、1％酸素の条件での細胞死の状態を観察した。21％酸素での培養と比較して、15％酸素では細胞数に変化はなかったが、それ以下の濃度はむしろ細胞数の増加を観察した。1%低酸素負荷の条件が最も低酸素負荷となるためこちらのモデルを採用する。低酸素に加え低血糖の状態を付加して虚血モデルでも確認できており、プレコンディショニングモデルを確立できたと考えている。βブロッカーは、マウスマクロファージ様細胞RAW 264.7細胞を用いて，エピネフリン（Epi）がリポポリサッカライド(LPS)で誘導される腫瘍壊死因子（TNF-α）のmRNA発現に及ぼす影響を検討した。プロプラノロールがEpiの効果に与える影響も検討した。LPS (100ng/ml) 添加後，Epi(1μM/L) 添加し，プロプラノロール (100，200μM/L) を添加した。TNF-α mRNA発現量をリアルタイムPCR法により定量した。Epiは用量依存的にTNF-α mRNA発現量を有意に減少させた．LPSはTNF-α mRNA発現量を有意に増加させた。EpiはLPSに誘導されたTNF-α mRNA発現量を有意に減少させた。プロプラノロールはエピネフリンによって抑制されたTNF-α mRNA発現量を有意に増加させた．Epiはベースライン並びにLPSで誘導されるTNF-α mRNA発現量を減少させた。プロプラノロールはTNF-α mRNA発現量に及ぼすエピネフリンの効果に拮抗した。