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ホ乳類Lys-49型ホスホリパーゼA_2の探索

搜索哺乳动物 Lys-49 型磷脂酶 A_2

基本信息

批准号：
08878092
负责人：
下東康幸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、Lys-49-PLA_2をホ乳類の組織に探索することである。このため、まずタイプIIのヘビ毒Asp49-PLA_2の62種およびヘビ毒Lys49-PLA_2の10種、タイプIIのホ乳類Asp49-PLA_2の14種のアミノ酸配列のアラインメントにより、(1)全てのPLA_2に保存されているアミノ酸配列、(2)タイプIIヘビ毒Asp49-PLA_2、ヘビ毒Lys49-PLA_2、ホ乳類Asp49-PLA_2のそれぞれに特異的に保存されているアミノ酸配列を決定した。これらを相互に比較・解析し、ホ乳類に存在するLys49-PLA_2として高い確率で想定できるアミノ酸配列を決定した。これと既知のcDNA配列に従って、プライマーを設計した。5'側のプライマーとしてHlys-1(27mer)、3'側のプライマーとしてHlys-2(30mer)を合成した。ヒト白血球由来の遺伝子ライブラリーに対してPCRを行ったところ500bpほどのPCR産物が得られた。これをPTV118Nベクターに組み込みシークエンスを解析した。しかし、PLA_2に相当するものは現在まで得られていない。一方、3'側プライマーHlys-3(64mer)をγ-^<32>Pあるいはα-^<32>Pでラベル死、ハイブリダイゼーションを行った。しかし、該当のクローンは得られなかった。そこで、タイプIIのヘビ毒Lys49-PLA_2であるBPII(ハブ由来)のcDNAクローンをプローブにハイブリダイゼーションを行ったところ、7個のポジティブクローンを得た。現在これらの塩基配列を解析中であるが、BPII特異的プライマーを用いることの有効性が考えられたので、BPIIの5'側および3'側のプライマーおよびHlys1を用いてPCRを実施した。約400bpのPCR産物を得て、現在配列を解析中である。このように、現在までLys49-PLA_2の特性をもつ配列を得るにいたっていないが、ヘビ毒由来のBPIIクローンに強くハイブリダイゼーションするものが得られたことより、ヒト型のLys49-PLA_2存在の可能性が強く期待される。

The purpose of this study is to explore the structure of Lys-49-PLA_2 in milk. 62 species of Asp 49-PLA_2, 10 species of Lys 49-PLA_2, 14 species of Asp49-PLA_2, 14 species Asp49-PLA_2 is the most important component of the protein. The results of the comparative analysis showed that Lys49-PLA2 was present in the milk and the acid sequence was determined with high accuracy. This is a well-known cDNA sequence. Hlys-1(27mer) on the 5'side and Hlys-2(30mer) on the 3'side were combined. The PCR product of 500bp DNA sequence was obtained. The PTV118N is the first to be analyzed. PLA_2 is the equivalent of a single cell phone. A party, 3'-side, Hlys-3(64mer), γ-^<32>P, α-^ P, α-^<32>P, αWhen the time comes, you will be able to get a good answer. In addition, there are 7 different types of BPII cDNA, such as Lys49-PLA_2 and Lys49-PLA_2. Now, BPI is used in the analysis of base pairs. BPI is used in the analysis of base pairs. A PCR product of approximately 400bp was obtained and is now being analyzed. The characteristics of Lys49-PLA_2 are expected to be closely related to the origin of BPII and the possibility of the existence of Lys49-PLA_2.