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ホ乳類Lys-49型ホスホリパーゼA_2の探索

搜索哺乳动物 Lys-49 型磷脂酶 A_2

基本信息

批准号：
08878092
负责人：
下東康幸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、Lys-49-PLA_2をホ乳類の組織に探索することである。このため、まずタイプIIのヘビ毒Asp49-PLA_2の62種およびヘビ毒Lys49-PLA_2の10種、タイプIIのホ乳類Asp49-PLA_2の14種のアミノ酸配列のアラインメントにより、(1)全てのPLA_2に保存されているアミノ酸配列、(2)タイプIIヘビ毒Asp49-PLA_2、ヘビ毒Lys49-PLA_2、ホ乳類Asp49-PLA_2のそれぞれに特異的に保存されているアミノ酸配列を決定した。これらを相互に比較・解析し、ホ乳類に存在するLys49-PLA_2として高い確率で想定できるアミノ酸配列を決定した。これと既知のcDNA配列に従って、プライマーを設計した。5'側のプライマーとしてHlys-1(27mer)、3'側のプライマーとしてHlys-2(30mer)を合成した。ヒト白血球由来の遺伝子ライブラリーに対してPCRを行ったところ500bpほどのPCR産物が得られた。これをPTV118Nベクターに組み込みシークエンスを解析した。しかし、PLA_2に相当するものは現在まで得られていない。一方、3'側プライマーHlys-3(64mer)をγ-^<32>Pあるいはα-^<32>Pでラベル死、ハイブリダイゼーションを行った。しかし、該当のクローンは得られなかった。そこで、タイプIIのヘビ毒Lys49-PLA_2であるBPII(ハブ由来)のcDNAクローンをプローブにハイブリダイゼーションを行ったところ、7個のポジティブクローンを得た。現在これらの塩基配列を解析中であるが、BPII特異的プライマーを用いることの有効性が考えられたので、BPIIの5'側および3'側のプライマーおよびHlys1を用いてPCRを実施した。約400bpのPCR産物を得て、現在配列を解析中である。このように、現在までLys49-PLA_2の特性をもつ配列を得るにいたっていないが、ヘビ毒由来のBPIIクローンに強くハイブリダイゼーションするものが得られたことより、ヒト型のLys49-PLA_2存在の可能性が強く期待される。

The purpose of this study is to explore Lys-49-PLA_2 milk tissue.このため、まずタイプIIのヘビtoxicAsp49-PLA_2の62 kinds of およびヘビtoxic Lys49-PLA_2の1 0 kinds, タイプIIのホmilk Asp49-PLA_2の14 kinds of のアミノAcid formula のアラインメントにより, (1) 全てのPLA_2にされているアミノacid ligand, (2)タイプII ヘビtoxic Asp49-PLA_2, ヘビtoxic Lys4 9-PLA_2, milk type Asp49-PLA_2 is a specific に-preserved されているアミノacid sequence をdetermined した. Comparison and analysis of each other, the existence of dairy products, Lys49-PLA_2 and high accuracy, and the determination of acid alignment. It is known that the cDNA sequence is aligned and designed. 5' Side Hlys-1 (27mer), 3' side Hlys-2 (30mer), synthetic Hlys-2 (30mer).ヒトwhite blood cell originの伝子ライブラリーに対してPCRを行ったところ500bpほどのPCR Productが得られた.これをPTV118N ベクターに组み込みシークエンスをanalytics した.しかし、PLA_2に quite するものはnow まで得られていない. One side, 3' side プライマーHlys-3(64mer)をγ-^<32>Pあるいはα-^<32>Pでラベル死, ハイブリダイゼーションを行った.しかし、should be done られなかった.そこで、タイプIIのヘビtoxic Lys49-PLA_2であるBPII(ハブorigin)のcDNAクローンをプローブにハイブリダイゼーションを行ったところ、7のポジティブクローンを得た. Currently, the validity of the であるが and BPII-specific プライマーを used in the analysis of これらの塩婩をれたので、BPIIの5' side および3' side のプライマーおよびHlys1を Use いてPCR を実事した. A PCR product of approximately 400 bp has been obtained and is currently being sequenced and analyzed.このように、Now までLys49-PLA_2のcharacteristicsをもつ配arrayを得るにいたっていないが、ヘビ poison originのBPIIクローンにStrong and strong The possibility of the existence of type のLys49-PLA_2 is high and we are looking forward to it.