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ホ乳類Lys-49型ホスホリパーゼA_2の探索

搜索哺乳动物 Lys-49 型磷脂酶 A_2

基本信息

批准号：
08878092
负责人：
下東康幸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、Lys-49-PLA_2をホ乳類の組織に探索することである。このため、まずタイプIIのヘビ毒Asp49-PLA_2の62種およびヘビ毒Lys49-PLA_2の10種、タイプIIのホ乳類Asp49-PLA_2の14種のアミノ酸配列のアラインメントにより、(1)全てのPLA_2に保存されているアミノ酸配列、(2)タイプIIヘビ毒Asp49-PLA_2、ヘビ毒Lys49-PLA_2、ホ乳類Asp49-PLA_2のそれぞれに特異的に保存されているアミノ酸配列を決定した。これらを相互に比較・解析し、ホ乳類に存在するLys49-PLA_2として高い確率で想定できるアミノ酸配列を決定した。これと既知のcDNA配列に従って、プライマーを設計した。5'側のプライマーとしてHlys-1(27mer)、3'側のプライマーとしてHlys-2(30mer)を合成した。ヒト白血球由来の遺伝子ライブラリーに対してPCRを行ったところ500bpほどのPCR産物が得られた。これをPTV118Nベクターに組み込みシークエンスを解析した。しかし、PLA_2に相当するものは現在まで得られていない。一方、3'側プライマーHlys-3(64mer)をγ-^<32>Pあるいはα-^<32>Pでラベル死、ハイブリダイゼーションを行った。しかし、該当のクローンは得られなかった。そこで、タイプIIのヘビ毒Lys49-PLA_2であるBPII(ハブ由来)のcDNAクローンをプローブにハイブリダイゼーションを行ったところ、7個のポジティブクローンを得た。現在これらの塩基配列を解析中であるが、BPII特異的プライマーを用いることの有効性が考えられたので、BPIIの5'側および3'側のプライマーおよびHlys1を用いてPCRを実施した。約400bpのPCR産物を得て、現在配列を解析中である。このように、現在までLys49-PLA_2の特性をもつ配列を得るにいたっていないが、ヘビ毒由来のBPIIクローンに強くハイブリダイゼーションするものが得られたことより、ヒト型のLys49-PLA_2存在の可能性が強く期待される。

The purpose of this study is to explore the structure of Lys-49-PLA_2 in milk. 62 species of Asp 49-PLA_2, 10 species of Lys 49-PLA_2, 14 species of Asp49-PLA_2, 14 species Asp49-PLA_2 is the most important component of the protein. The results of the comparative analysis showed that Lys49-PLA2 was present in the milk and the acid sequence was determined with high accuracy. This is a well-known cDNA sequence. Hlys-1(27mer) on the 5'side and Hlys-2(30mer) on the 3'side were combined. The PCR product of 500bp DNA sequence was obtained. The PTV118N is the first to be analyzed. PLA_2 is the equivalent of a single cell phone. A party, 3'-side, Hlys-3(64mer), γ-^<32>P, α-^ P, α-^<32>P, αWhen the time comes, you will be able to get a good answer. In addition, there are 7 different types of BPII cDNA, such as Lys49-PLA_2 and Lys49-PLA_2. Now, BPI is used in the analysis of base pairs. BPI is used in the analysis of base pairs. About 400bp PCR product was obtained and now the sequence analysis is in progress. The characteristics of Lys49-PLA_2 are expected to be closely related to the origin of BPII and the possibility of the existence of Lys49-PLA_2.