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内分泌撹乱物質のホルモン受容体結合能および活性化能の同時評価測定法の開発

开发同时评价激素受体结合和内分泌干扰物激活能力的测量方法

基本信息

批准号：
13027268
负责人：
下東康幸
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

内分泌撹乱作用が懸念される非常に多数の既存化学物賓を、迅速にスクリーニングする方法が必要とされている。我々は最近、エストロゲン様作用が疑われる化合物500種類について受容体結合試験を実施し、結合親和性がノニルフェノールよりも数十倍から数百倍も強い化合物数種を見い出した。しかしながら、これら化学物質の内分泌撹乱作用の評価においては、受容体結合後の活性発現がホルモン作用なのか、抗ホルモン作用なのか、の判別が必要である。こうしたなか現在検討されているスクリーニング法は、これらについてそれぞれ別途に試験されねばならず、きわめて非効率的である。ところで、ホルモンや化学物質が受容体(アポ型)に結合すると、受容体の構造・コンホメーションが変化する(ホロ型)。女性ホルモン・エストロゲン受容体のリガンド複合体のX線結晶解析から、そのコンホメーション変化の内容はアゴニストと、アンタゴニストでは異なる。本研究ではまず、こうした受容体コンホメーション変化の違いを感知・センシングする抗体の調製を試みた。ホルモン結合による核内受容体(転写因子)のコンホメーションの特徴的な変化は、C末端部αヘリックス(H12)である。そこで、これをエピトープとする抗ウサギ・ポリクローナル抗体を調整した。精製した抗体はアゴニスト・17β-エストラジオール(E2)とアンタゴニスト・4-ヒドロキシタモキシフェンを識別した。さらに、アゴニストでも、E2とエストロン(E1)とを識別した。そこで、一連のアルキルフェノールについて検討したところ、E1様の応答を示すことが判明した。これらを総合的に解析したところ、本抗体のみを用いて検討することで、内分泌撹乱物質のホルモン受容体結合能と活性化能を同時に特異的に定量・測定できるアッセイ系の構築が可能であることが判明した。

The endocrine disrupting effect is very important because most of the existing chemicals are present, and the rapid response is necessary and the method is necessary. Recently, I have been conducting a 500 kinds of エストロゲン様 action and エストロゲン様 compound compound について receptor binding test.し、Binding affinity is tens of times and hundreds of times stronger, and several kinds of compounds are as strong as each other.しかしながら, これらchemical substance’s endocrine disrupting effect, evaluation of the endocrine disrupting effect, after receptor binding It is necessary to show the active effect of the active ingredient and the anti-active effect of the active ingredient.こうしたなかNow I am asking for されているスクリーニング法は、これらについてそれぞれdifferent ways to try 験されねばならず, きわめてnon-efficient である.ところで, ホルモンや chemical substance receptor (アポ type) and binding すると, receptor structure・コンホメーションが変化する (ホロ type). X-ray crystallographic analysis of the female ホルモン・エストロゲン receptor complex のリガンド complexのコンホメーション変化のcontent はアゴニストと, アンタゴニストではdifferent なる. In this study, we conducted a trial on the modulation of receptors, receptors, and antibodies. The ホルモン binds to the による nuclear receptor (転WRITING factor) のコンホメーションの特徴 and the C-terminal α ヘリックス (H12) である.そこで、これをエピトープとするAnti-ウサギ・ポリクローナルantibodyを Adjustmentした. Purified antibody はアゴニスト・17β-エストラジオール(E2)とアンタゴニスト・4-ヒドロキシタモキシフェンをidentificationした.さらに、アゴニストでも、E2とエストロン(E1)とをidentificationした.そこで, 一连のアルキルフェノールについて検曰したところ, E1様の応 Answer を Show すことが见明した. The analysis of the combination of これらを総合したところ, the use of this antibody and the いて検することで, the acceptance of endocrine disrupting substances It is possible to quantify and measure specific binding energy and activation energy at the same time, and it is possible to determine the structure of the system.