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N端オクタペプチドリピート多重体化によるプリオン感染型-正常型の特異的分子認識

N端八肽重复多重识别朊病毒感染型和正常型的特异性分子识别

基本信息

批准号：
17657038
负责人：
下東康幸
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657038/
关键词：
生体分子蛋白質分子認識感染症

项目摘要

前年度は、アミノ酸残基23〜95位、アミノ酸残基23〜100位、アミノ酸残基23〜105位の3種について、タンパク質を発現・精製し、これらがポリマー化することをMALDI-TOF質量分析で明らかにした。そこで、本年度はこうしたタンパク質がポリマー化する要因を解明するため、変異タンパク質の発現プラスミドを構築し、発現に成就した。現在、精製物について解析を実施している。1 オクタペプチド構造のポリマー化の解析のための変異タンパク質発現プラスミドの構築(1)オクタペプチドのリピート数増減発現プラスミドの構築オクタペプチドのリピート数の多さがプリオン病発症年齢の早さ、感染の起きやすさに関連しているとの報告がある。これらがTrp/Hisのπ/πスタッキング相互作用による分子間多重体化の起こり易さ、安定度に相関している可能性があり、このため、リピート数を系統的に違えたプリオンタンパク質PrP(23-100)誘導体の発現プラスミド調製法の開発に取組んだ。リピート数1〜13までの発現プラスミドを作製し、発現・精製を行った。リピートの繰り返し13個のタンパク質は、発現するものの、精製過程で沈殿・凝集が起きやすくなることが判明した。他のものにつて現在、相互作用を解析中である。現在までに分析条件の設定に成就した。(2)オクタペプチドのTrp→Ala変異プラスミドの構築Trp/Hisのπ/πスタッキング相互作用による分子閻多重体化の起こり易さ、安定度に相関しているかを検討するために、リピート中のTrpをAlaに変異させた発現プラスミドを構築した。Trp→Ala変異体については、リピート数も1から5まで変化させたプラスミドの構築に成就した。これらは野生型の揚合と同じ方法で発現・精製が可能であった。現在、相互作用を解析中である。2 オクタペプチドリピート構造の感染性異常型プリオン発現抑制の検討恒常的に感染性の異常型プリオンを発現する細胞株が樹立されている。動物衛生研究所より、マウス神経芽細胞のスクレイjピー持続感染株N2a58-Scの分与を受け、これに対する発現タンパク質の影響をみる試験系の構築を行い、これに成就した。

Three kinds of につ of the previous year: aminic acid residues 23 to 95, aminic acid residues 23 to 100, and aminic acid residues 23 to 105いて, タンパクQuality を発発発発・refinedし, これらがポリマー化することをMALDI-TOF mass analysis で明らかにした. The main reason for the change of the current year's performance is clearly explained.るため、変义タンパク性の発appearsプラスミドをconstructsし、発appearsにachievementした. Now, the refined product is analyzed and analyzed. 1オクタペプチドstructural analysis Nowadays, the structure of the building (1), the new building has been increased and decreased.ラスミドのconstruct オクタペプチドのリピートnumber の多さがプリオン disease 発The early onset of the disease and the early onset of infection are related to the report of the disease.これらがTrp/Hisのπ/πスタッキングInteractionによるIntermolecular multipletizationのriseこりeasyさ、StabilityにCorrelationしているPossibilityがあり、このため、リピートnumberを system's にviolated えたプリオンタンパクquality PrP( 23-100) The modulation method of the inducer is the same as that of the inductor.リピートnumber 1~13までの発行った. Rinse , the refining process is the same as the agglomeration process. He is currently analyzing the interaction. Now I will analyze the setting of conditions and achieve success. (2) オクタペプチドのTrp→Ala変different プラスミドのconstructed Trp/Hisのπ/πスタッキングInteracting molecule 阎multiplexの起こりEASYさ、STABILITY にrelated しているかを検取するために、リピート中のTrpをAlaに変differentさせた発existingプラスミドを CONSTRUCTIONした. Trp→Ala変different bodyについては、リピートnumberも1から5まで変化させたプラスミドのconstructにachievementした. It is possible to combine wild-type products with the same method and to refine them. Now, the interaction is being analyzed. 2 Discussion on the current suppression of infectious abnormality in the structure of オクタペプチドリピートstructure The abnormal type of normal infectious disease has been established through the establishment of cell lines. Analyzes of the infectious strain N2a58-Sc from the Animal Health Research Institute of Japan Influenced by the quality of をReceived け、これに対する発成タンパクquality をみるtrial system のconstruct を行い、これにachievement した.