N端オクタペプチドリピート多重体化によるプリオン感染型-正常型の特異的分子認識

N端八肽重复多重识别朊病毒感染型和正常型的特异性分子识别

• 批准号: 17657038
• 负责人: 下東 康幸
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657038/
• 关键词: 生体分子; 蛋白質; 分子認識; 感染症

前年度は、アミノ酸残基23〜95位、アミノ酸残基23〜100位、アミノ酸残基23〜105位の3種について、タンパク質を発現・精製し、これらがポリマー化することをMALDI-TOF質量分析で明らかにした。そこで、本年度はこうしたタンパク質がポリマー化する要因を解明するため、変異タンパク質の発現プラスミドを構築し、発現に成就した。現在、精製物について解析を実施している。1 オクタペプチド構造のポリマー化の解析のための変異タンパク質発現プラスミドの構築(1)オクタペプチドのリピート数増減発現プラスミドの構築オクタペプチドのリピート数の多さがプリオン病発症年齢の早さ、感染の起きやすさに関連しているとの報告がある。これらがTrp/Hisのπ/πスタッキング相互作用による分子間多重体化の起こり易さ、安定度に相関している可能性があり、このため、リピート数を系統的に違えたプリオンタンパク質PrP(23-100)誘導体の発現プラスミド調製法の開発に取組んだ。リピート数1〜13までの発現プラスミドを作製し、発現・精製を行った。リピートの繰り返し13個のタンパク質は、発現するものの、精製過程で沈殿・凝集が起きやすくなることが判明した。他のものにつて現在、相互作用を解析中である。現在までに分析条件の設定に成就した。(2)オクタペプチドのTrp→Ala変異プラスミドの構築Trp/Hisのπ/πスタッキング相互作用による分子閻多重体化の起こり易さ、安定度に相関しているかを検討するために、リピート中のTrpをAlaに変異させた発現プラスミドを構築した。Trp→Ala変異体については、リピート数も1から5まで変化させたプラスミドの構築に成就した。これらは野生型の揚合と同じ方法で発現・精製が可能であった。現在、相互作用を解析中である。2 オクタペプチドリピート構造の感染性異常型プリオン発現抑制の検討恒常的に感染性の異常型プリオンを発現する細胞株が樹立されている。動物衛生研究所より、マウス神経芽細胞のスクレイjピー持続感染株N2a58-Scの分与を受け、これに対する発現タンパク質の影響をみる試験系の構築を行い、これに成就した。

Before the annual は, ア ミ ノ acid residues 23 ~ 95, ア ミ ノ acid residues 23 ~ 100, ア ミ ノ acid residues 23 ~ 105 の three に つ い て, タ ン パ ク qualitative を 発 now, refined し, こ れ ら が ポ リ マ ー change す る こ と を MALDI - TOF mass analysis で Ming ら か に し た. そ こ で, this year's は こ う し た タ ン パ ク qualitative が ポ リ マ ー change す を る will interpret す る た め, - different タ ン パ ク qualitative の 発 now プ ラ ス ミ ド を build し, 発 now に achievement し た. Now, the refined substance に に て て て analysis を application て る る. 1 オ ク タ ペ プ チ ド tectonic の ポ リ マ ー chemical analytical の の た め の - different タ ン パ ク qualitative 発 now プ ラ ス ミ ド の building (1) オ ク タ ペ プ チ ド の リ ピ ー ト number raised 発 reduction now プ ラ ス ミ ド の build オ ク タ ペ プ チ ド の リ ピ ー ト の much さ が プ リ オ 発 ン disease syndrome in 齢 の さ early, infection の き や す さ に masato even し て い る と の report が あ る. こ れ ら が Trp/ihs の PI/PI ス タ ッ キ ン グ interaction に よ る intermolecular multiple body is changed since の こ り さ, stability and degree of phase に masato し て い る possibility が あ り, こ の た め, リ ピ ー ト を system of に violations え た プ リ オ ン タ ン パ ク qualitative PrP (23-100) induced body の 発 now プ ラ ス ミ ド modulation method is の open 発 に take group ん だ. Youdaoplaceholder0 ト ト numbers 1 to 13まで リピ development プラス ドを ドを production を, development and refinement を lines った. リ ピ ー ト の Qiao り return し 13 の タ ン パ ク は, 発 now す る も の の, refining process で Shen Dian, agglutination が up き や す く な る こ と が.at し た. He <s:1> に に て て now, interaction を in the analysis である. Now までに analyze the conditions までに set に to achieve た. (2) オ ク タ ペ プ チ ド の Trp - Ala - different プ ラ ス ミ ド の build Trp/ihs の PI/PI ス タ ッ キ ン グ interaction に よ る molecular yan multiple body change の up こ り さ, stability and degree of phase に masato し て い る か を beg す 検 る た め に, リ ピ ー ト の in Trp を Ala に - different さ せ た 発 now プ ラ ス ミ ド を build し た. Trp - Ala - variant に つ い て は, リ ピ ー ト number も 1 か ら 5 ま で variations change さ せ た プ ラ ス ミ ド の build に achievement し た. The wild type <s:1> synthesis と and じ method で occurrence · refinement が may であった. Now, in the analysis of the interaction を である. 2 オ ク タ ペ プ チ ド リ ピ ー ト tectonic type abnormal の infectious プ リ オ ン 発 inhibit の now beg constant 検 に infectious type abnormal の プ リ オ ン を 発 now す る cell lines が set さ れ て い る. Animal health institute よ り, マ ウ ス god 経 bud cells の ス ク レ イ j ピ ー 続 infection strains N2a58 - Sc の points and を け, こ れ に す seaborne る 発 now タ ン パ ク qualitative の influence を み る test line の build を い, こ れ に achievement し た.

项目成果

Conformation Change-senseing Assay Using, Monoclonal Antibody for N-terminal Octapeptide Repreat Region of Prion Protein

使用单克隆抗体进行朊病毒蛋白 N 末端八肽重复区的构象变化传感测定

• 发表时间: 2005
• 期刊: Peptide Science 2004
• 作者: M.Kawano;et al.
• 通讯作者: et al.

Monoclonal antibody sensing assay for conformation change induced by metal binding to prion protein terminal octarepear domain

单克隆抗体传感测定金属与朊病毒蛋白末端八角结构域结合诱导的构象变化

• 期刊: Peptide Science 2005 (In press)
• 作者: S.Yokotani;et al.
• 通讯作者: et al.

Design and synthesis of a-helix peptide binding to prion protein N-terminal octarepeat domain

与朊病毒蛋白N末端八重结构域结合的α-螺旋肽的设计与合成

• 发表时间: 2006
• 期刊: Peptide Science 2005
• 作者: Keita KOGA;et al.
• 通讯作者: et al.

Structural Characteristics of the N-Terminal Octapeptide Repeat Region of Prion Protein in Self-Polymerization

朊病毒蛋白N端八肽重复区自聚合的结构特征

• 发表时间: 2005
• 期刊: Peptide Science 2004
• 作者: Keita KOGA;et al.;Y.Horiuchi.et al.
• 通讯作者: Y.Horiuchi.et al.

Specific dimerization of prion protein N-terminal domain

朊病毒蛋白 N 末端结构域的特异性二聚化

• 发表时间: 2006
• 期刊: Peptide Science 2005
• 作者: Ayami MATSUSHIMA;et al.
• 通讯作者: et al.