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概日リズムのペースメーカーホルモンPDH受容体の発現クローニング

昼夜节律起搏激素PDH受体的表达克隆

基本信息

批准号：
11878113
负责人：
下東康幸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カニの色素拡散ホルモンとして発見された神経ペプチドPigment Dispersing Hormone(色素拡散ホルモン・PDH)は、概日リズムの発現ペースメーカーとして考えられている。本研究の目的は、PDHの受容体を同定し、概日リズム発現の分子機構を明らかとすることである。このため、特有の内在性PDHペプチドを持ち、概日リズムの発現が明らかなショウジョウバエについてPDHペプチドの放射ラベル体を化学合成し、脳のホモジネートに対して結合試験を実施し、受容体存在の有無を検討する。ショウジョウバエ・PDHのアミノ酸配列(AsnSerGluLeuIleAsnSerLeuLeuSer LeuProLysAsnMetAsaAspAla-NH_2)はカニのPDHペプチドと3残基が異なるのみである。本研究ではまず、ショウジョウバエのPDHを化学合成した。この化学合成においては、N末端アスパラギンの導入が非常に困難であった。しかも、β転位し易いジペプチド配列AsnSerが2カ所もあり、これに起因する副反応などのため合成に細心の注意が必要であることが判明した。天然相当のペプチドはHPLCにより精製し、これのN末端に^<125>Iでラベルしたボートハンター基(BH)を導入を試みた。PDHペプチドへのBH基の導入は必ずしも効率的ではなかったが、調製した^<125>1-BH-PDHを用いて、ショウジョウバエ脳ホモジネートに対する結合試験を実施した。その結果、^<125>I-BH-PDHの高濃度領域において特異的結合が観察された。しかしながら、その結合は十分なものではなく、さらに、^<25>I-BH-PDHが半減期、結合親和性の観点から最適なトレーサーではないと判断されたため、4位ロイシンをデヒドロロイシンにし、これを還元的にトリチウムラベルすべく、現在PDH前駆体アナログを合成している。本研究の結果は、ショウジョウバエ脳に、しかもの膜画分にPDHの受容体が存在することを強く示唆した。今後、より適正なトレーサーで受容体の同定できることが強く期待される。

Pigment Dispersing Hormone(Pigment Dispersing Hormone·PDH) is a new type of pigment dispersion. The purpose of this study is to identify and summarize the molecular mechanisms of PDH receptor development. In this case, the unique intrinsic PDH membrane is maintained, and the discovery of the future polymer is now clear. It is possible to chemically synthesize the radioactive substance of the PDH membrane, carry out combined experiments with the membrane, and investigate the presence or absence of the receptor. The PDH amino acid sequence (AsnSerGluLeuIleAsnSerLeuLeuSer LeuProLysAsnMetAsaAspAla-NH_2) was found to be a variant of the PDH amino acid sequence. In this study, the chemical synthesis of PDH was studied. It is very difficult to introduce this chemical synthesis method. The reason for this is that we have to pay attention to the synthesis of these molecules. The N-terminal part of the natural equivalent was purified by HPLC, and the <125>BH was introduced. The introduction of PDH into the BH matrix must be carried out in combination with the modulation of PDH in order to achieve high efficiency<125>. As a result, <125>specific binding to I-BH-PDH was observed in high concentration areas. The <25>binding affinity of PDH is determined by determining whether the binding affinity of PDH is optimal, whether the binding affinity is optimal, whether the binding affinity is optimal. The results of this study strongly suggest the existence of PDH receptors in membrane systems. From now on, we're looking forward to seeing you.