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凍結胚による効率的遺伝子操作マウスの開発システムの確立

利用冷冻胚胎建立高效的基因工程小鼠发育系统

基本信息

批准号：
09878202
负责人：
中尾和貴
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

標的遺伝子組換えマウスを得るには、目的の相同組換え体ES細胞と胚とからキメラマウスを作成する必要がある。キメラマウスを作る手段の一つとして、胚盤胞にES細胞を注入する方法がある。この注入キメラ法は、ES細胞、胚盤胞、受容雌を準備する必要があるが、これらを計画にそって確実に準備することはきわめてむずかしい。多くの場合、準備された受容雌の数が胚盤胞の数に比べて多かったり、逆に少なかったりするなどの無駄が生じる。そこで本研究においては、凍結胚盤胞を使用し、受容雌の数に応じてこれを融解することにより、キメラマウス作成過程の省力化と安定化を試みた。自然交配より得られた胚盤胞を、我々が開発したガラス化凍結保存法を用いて、液体窒素タンクに保存した。凍結胚盤胞を計画に従って融解し、それにES細胞を注入し、キメラマウスを作成した。キメラマウスは、成熟後交配させ、ES細胞由来遺伝子の子孫への伝達の有無を確認した。ガラス化凍結胚盤胞80個の融解後の生存成績は、80%(64/80)であった。正常な胚すべてにそれぞれES細胞を注入し、偽妊娠雌マウスに移植したところ2匹の雄キメラマウスが得られた。このキメラマウスの両方からES細胞由来の産仔が得られた。また同様に、それぞれ別々の標的遺伝子組換え体ES細胞6種類から、ガラス化凍結胚盤胞を用いた標的遺伝子組換えマウスの作成を試みた。その結果、融解後得られた正常な胚盤胞のそれぞれにES細胞を注入した結果、ES細胞を注入した胚盤胞の約1〜5%がキメラマウスに発生し、これらのマウスからES細胞由来の遺伝子が伝達された産仔が得られた。このことから、凍結胚盤胞から、標的遺伝子組換えマウスを作成することができることが実証され、統御することがむずかしいマウスの生理によって無駄の多かったキメラマウス作成の効率が格段に向上した。

The target sub-set is obtained by the same set of ES cells. The method of injecting ES cells into blastoderm cells The injection method, ES cells, blastoderm cells, and receptor preparation are necessary for the preparation of the injection plan. In many cases, the number of female cells in the blastoderm is more than that in the case of preparation, and the number of female cells in the blastoderm is less than that in the case of preparation. In this study, the use of frozen blastoderm cells, the number of female cells, and the labor saving and stabilization of the production process were studied. Natural mating is the first step in the development of blastoderm cells, and the first step in the preservation of blastoderm cells is the use of liquid or organic freezing. Frozen blastoderm cells are planned to be thawed, and ES cells are injected and prepared. The origin of ES cells is confirmed by the presence or absence of offspring. The survival rate of 80 frozen blastoderm cells after thawing was 80%(64/80). Normal embryos are injected into the uterus, and pseudo-pregnant females are transplanted into the uterus. The origin of ES cells and the birth of ES cells 6 kinds of frozen blastoderm cells are used for the preparation of target gene groups. After thawing, the ES cells were injected into the blastoderm cells. About 1 ~ 5% of the blastoderm cells were injected into the blastoderm cells. The frozen blastoderm cells and the target gene sub-group are produced in the physiological state of the blastoderm cells. The efficiency of the production is high.