遺伝子治療への応用をめざした肝幹細胞の鈍化・回収法の確立の試み

尝试建立用于基因治疗的钝化和恢复肝干细胞的方法

• 批准号: 08877197
• 负责人: 深尾 立
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877197/
• 关键词: 肝臓; 幹細胞; 遺伝子治療

単離した肝細胞集団の中から、極小数しか存在せず、かつ形態によって区別ができない多能性を持つ肝幹細胞を、FACS(Fluorescence activated cell sorter)とモノクローナル抗体を用いた回収法により濃縮・鈍化し、それらの培養系・細胞移植系の確立を行うことを目的として研究を行った。まず、in vitro肝幹細胞機能解析系の確立を目的として、マウス胎仔肝細胞の培養系を検討した。ある細胞の多分化能を示すには、1個の細胞から複数の異なった細胞系列の成熟細胞が分化派生することを示すことが必須である。そこで、培養開始時の播種密度を極めて低くすることにより、1個の肝細胞を始点とするクローン性コロニーを効率よく誘導可能な培養条件を比較した。その結果、細胞外マトリックスとしてはラミニン、コラーゲン-IVなどの基底膜を構成するマトリックスが有用であり、サイトカインではhepatocyte growth factor (HGF)の添加が必須であることが判明した。最も良い条件では、6日間で1個の胎仔肝細胞がクローン性に1000個以上の細胞に増殖した。また、in vivo解析系としてCSA congenic mouseをもちいた肝細胞移植系を確立した。次に、マウス胎仔肝から単離した細胞群を、FACSとモノクローナル抗体により分画化することを試みた。まず最初に、血球特異的抗原であるCD45およびTER119をもちいて、胎仔肝中の非血球分画を明らかにした。そして、CD45^-TER119^-細胞をFACSで回収し上記の機能解析を行ったところ、高い増殖能・多分化能を持ち、長期間にわたってin vivoにおいて肝小葉的構築を保つことが判明した。したがって、この細胞群中に肝幹細胞が存在することが強く示唆された(投稿準備中)。

The study was conducted on the development of liver stem cells, Fluorescence activated cell sorter (FACS) and the use of liver stem cell antibodies in vitro, in vitro and in vitro. Objective: To establish a functional analysis system for fetal liver stem cells in vitro. A cell can differentiate into multiple cells, and a cell can differentiate into multiple mature cells. The seeding density at the beginning of culture was extremely low, and the initial rate of 1 hepatocyte was low. As a result, it was found that extracellular matrix growth factor (HGF) was necessary for the formation of basement membrane. In the best condition, 1 fetal liver cell was cultured in 6 days, and more than 1000 cells were cultured. The in vivo analysis system was established by CSA congenic mouse. In addition, the fetal liver was isolated from the cell population, and the FACS assay was used to analyze the results. CD45 and TER119 are the primary and hematological antigens, and non-hematological markers in fetal liver are also present. The function analysis of CD45-TER119-cell FACS in vivo was carried out, and the high proliferation ability and multi-differentiation ability were maintained. The long-term development of liver lobules was identified. The presence of liver stem cells in these cell populations is strongly indicated (submission preparation in progress).

项目成果

H.Taniguchi, et al.: "The extent of chimerism determines the mode of tolerance in mixed bone marrow chimeras" Transplantation Proceedings. 29. 1193-1195 (1997)

H.Taniguchi 等人：“嵌合程度决定了混合骨髓嵌合体的耐受模式”移植论文集。

H.Taniguchi, et al.: "Constant delivery of proinsulin by encapsulation of transfeuted cells" Jounnal of Sungical Research. 70. 41-45 (1997)

H.Taniguchi 等人：“通过封装转染细胞持续输送胰岛素原”《Sungical Research 杂志》。

M.Otsuka, et al.: "Neutrophil elastase activity in hepatic ischemia reperfusion injury." Transplantation Proceedings. 29. 2997-2999 (1997)

M.Otsuka 等人：“肝缺血再灌注损伤中的中性粒细胞弹性蛋白酶活性。”

H.Taniguchi,et al.: "Long-term and multi-lineage bone marrow reconstitution in normal un-treated recipients." Transplantation Proceedings. 28. 1052-1054 (1996)

H.Taniguchi 等人：“正常未经治疗的受者的长期和多谱系骨髓重建。”