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分子進化工学による多糖分解酵素の耐アルカリ性化

分子進化工学による多糖分解酵素の耐アルカリ性化
通过分子进化工程研究多糖降解酶的耐碱性
批准号：
09875199
负责人：
中村 聡
金额：
$1.41万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1997 至 1998
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09875199/
关键词：
キシラナーゼ耐アルカリ性分子進化工学枯草菌好アルカリ性細菌

项目摘要

项目成果

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β-1,4-キシランは陸上植物細胞壁中に多く含まれる多糖であり,単糖であるD-キシロースがβ-1,4一結合を介して鎖状に連なった構造をとる.キシランのβ-1,4一結合を加水分解する酵素がキシラナーゼである.本研究では,枯草菌が生産するキシラナーゼAの分子進化工学による耐(好)アルカリ性化を目的としている.キシラナーゼA遺伝子の好アルカリ性細菌における発現効率の向上を目的として,Bacillus sp.41M-1株キシラナーゼJ遺伝子のプロモーター・シグナル領域を連結したキメラキシラナーゼ遺伝子を構築し,Bacillus sp.C125株およびBacillus OF4株における発現を試みた.しかしながら,これら二種の好アルカリ性細菌が形成するハローは明確なものではなく,分子進化工学のための宿主としては不適当と判断された.そこで,大腸菌宿主とフィルターアッセイを組み合わせた方法により,分子進化工学実験を行うこととした。キシラナーゼ遺伝子へのランダム変異の導入には,修復能を欠損した大腸菌XL-1 Red株を用いた。変異導入およびフィルターアッセイのサイクルを5回繰り返し,アルカリ性および中性で大きなハローを形成するようになった形質転換体を取得した.しかしながら,このクローンに含まれるキシラナーゼ遺伝子領域には変異箇所は認められず,プラスミドコピー数の増加に伴う生産量の向上が原因であることが明らかとなった.すなわち,XL-1Red株を用いたランダム変異導入の効率は低く,キシラナーゼA構造遺伝子のみならず,ベクターやプロモーター領域に対しても変異を誘発してしまうという欠点が顕在化した.最後に,PCRを利用した変異導入方法について検討を進めた.その結果,目的とする変異導入率を達成することができた.
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专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Ryousuke Mizui: "Amino Acid Substitutions at the Subunit Interface Cause Thermal Stabilization in IPMDH of Bacillus coagulans" Nucleic Acids Symposium Series. 39. 203-204 (1998)
Ryousuke Mizui：“亚基界面的氨基酸取代导致凝结芽孢杆菌 IPMDH 的热稳定性”核酸研讨会系列。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
離散化された幾何学的フローの研究
  • 批准号：
    24K16917
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
  • 资助金额：
    $3.08万
  • 财政年份：
    2024
  • 负责人：
    中村 聡
  • 依托单位：
    Tokyo Institute of Technology
ポリマーブラシによるコロイドナノ粒子の形状選択的分離法の開発
  • 批准号：
    24K17574
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
  • 资助金额：
    $2.16万
  • 财政年份：
    2024
  • 负责人：
    中村 聡
  • 依托单位：
    Hokkaido University
膵・胆道癌の早期診断を目指したバイオマーカーの検索と臨床応用
  • 批准号：
    22K20826
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
  • 资助金额：
    $1.83万
  • 财政年份：
    2022
  • 负责人：
    中村 聡
  • 依托单位：
    Kyushu University
標準的ケーラー計量の場の量子化を用いたファノ多様体の幾何構造の研究
海外基金