老化形質の発現を統括する転写因子とその調節配列の同定による老化の制御手段の開発

通过识别转录因子及其控制衰老特征表达的调控序列来开发控制衰老的方法

• 批准号: 09557204
• 负责人: 松岡 耕二
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09557204/
• 关键词: 老化; 遺伝子発現; 転写因子

本研究は,細胞老化に伴って発現が変化する遺伝子の転写をグローバルに制御している分子を特定することを目的としている。まず3年計画の初年度としては,これまで行なってきた細胞内シグナル伝達システムの解析を展開して,老化に伴うシグナル伝達分子の発現変化の分析へと進めた。培養ヒト繊維芽細胞を用いたRT-PCRにより,調べた分子のうち,Grb2/Ash,c-Crk,Nck(いずれもアダプター蛋白質),PI3-キナーゼp100α(線虫Age-1相同分子),WRN(早老症原因ヘリカーゼ)の発現が老化した細胞で低下していることが初めて分かった。このことは,これまで知られていたコラーゲン,フィブロネクチンなど細胞骨格,細胞外マトリックスに関連する蛋白質の外にも,老化に伴ってこのような発現の変化が一斉に起こっていることを示しており,転写制御に関わる出来事の,老化における重要性が改めて明らかにされた。引き続いて,そのような転写制御を解析するシステムを樹立するため,オステオネクチン,プラスミノーゲン活性化因子阻害蛋白質など老化関連分子やPCNA,hsp70など細胞制御分子のプロモーター領域DNAを調製して,サウス・ウェスタン法で核蛋白質との結合を調べたところ,老化に関係して量的な変動を示す核蛋白質の存在が検出された。これらのプロモーター領域DNAを磁石ビーズに繋いで核蛋白質を反応させると,それぞれのDNAに特異的に結合していると思われる分子種の結合が見られたので,これらの蛋白質を分離する手段として応用できると考えられる。そこで,ファージ・ディスプレイ・ベクターを用いたcDNAライブラリーを構築して,プロモーター領域DNA連結磁石ビーズに結合するファージを単離することによって,特異的結合蛋白質を提示しているcDNAクローンを選択的に取り出す実験を進めている。

This study は, cell aging に companion っ て 発 が now - the す る heritage 伝 son の planning write を グ ロ ー バ ル に suppression し て い る molecular を specific す る こ と を purpose と し て い る. ま ず 3 years plan early の annual と し て は, こ れ ま で line な っ て き た intracellular シ グ ナ ル 伝 da シ ス テ ム の parsing を expand し て, aging に with う シ グ ナ ル 伝 operatives の 発 now - the の analysis へ と into め た. Cultivate ヒ ト 繊 d を bud cells with い た rt-pcr に よ り, adjustable べ た molecular の う ち, Grb2 / Ash, c - Crk, Nck (い ず れ も ア ダ プ タ ー protein), PI3 - キ ナ ー ゼ p100 alpha (nematodes Age - 1 the same molecule), WRN (early in the disease reason ヘ リ カ ー ゼ) の 発 now が aging し で た cells is low Youdaoplaceholder0 て る とが とが initial めて score った った. こ の こ と は, こ れ ま で know ら れ て い た コ ラ ー ゲ ン, フ ィ ブ ロ ネ ク チ ン な ど bone cells, extracellular マ ト リ ッ ク ス に masato even す る protein の に も, aging に with っ て こ の よ う な 発 の now - the が a 斉 に up こ っ て い る こ と を shown し て お り, planning to write suppression に masato わ の る out things, aging に お け る importance が change め て Ming ら にされた にされた. Lead き 続 い て, そ の よ う な planning write suppression を parsing す る シ ス テ ム を set す る た め, オ ス テ オ ネ ク チ ン, プ ラ ス ミ ノ ー ゲ ン activation factor resistance against protein な ど aging masato even molecular や PCNA, hsp70 な ど cell system royal molecular の プ ロ モ ー タ DNA を ー field modulation し て, サ ウ ス · ウ ェ ス タ で nuclear protein と ン method の combining を adjustable べ た と こ ろ, aging に masato is し て quantity な - move を の す nuclear proteins exist in が 検 out さ れ た. こ れ ら の プ ロ モ ー タ DNA を ー field magnet ビ ー ズ に 繋 い で nuclear protein を anti 応 さ せ る と, そ れ ぞ れ の に specific DNA に combining し て い る と think わ れ る の molecular species が see ら れ た の で, こ れ ら の protein separation を す る means と し て 応 with で き る と exam え ら れ る. そ こ で, フ ァ ー ジ · デ ィ ス プ レ イ · ベ ク タ ー を with い た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を build し て, プ ロ モ ー タ DNA link ー field magnet ビ ー ズ に combining す る フ ァ ー ジ を 単 from す る こ と に よ っ て, specific binding protein を prompt し て い る cDNA ク ロ ー ン を sentaku に take り out す be 験 を into め て い る.

项目成果

Matuoka,K.: "A norel ligand for an SH3 domain of the adaptor protein Nckbears an SH2 domain and nuclear signaling motifs" Biochem.Biophys.Res.Commun.239. 488-492 (1997)

Matuoka,K.：“衔接蛋白 Nck 的 SH3 结构域的 Norel 配体具有 SH2 结构域和核信号基序”Biochem.Biophys.Res.Commun.239。

Takenawa,T.: "Signalig through Grb2/Ash-control of the Raspathway and cytoskeleton" Current Topics Microbiol.Immunol.228. 325-342 (1998)

Takenawa,T.：“通过 Raspathway 和细胞骨架的 Grb2/Ash 控制发出信号”当前主题 Microbiol.Immunol.228。

Matuoka,K.: "Pownregulated expression of the signaling mokcules Nck,c-Crk,Grb2/Ash PL3-kiuase pllod and WRN cherig fibroblgst aging in bitro" Biochim.Bioplys.Acta. (in press).

Matuoka,K.：“双向调节信号分子 Nck、c-Crk、Grb2/Ash PL3-kiuase pllod 和 WRN cherig filbgst 老化的表达”Biochim.Bioplys.Acta。