Action des microvésicules dans les tissus solides

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Mon programme de recherche a pour objectif de comprendre les interactions existantes entre les cellules d'un tissu. A court terme, mon but est de déterminer le rôle des microvésicules (MV), un moyen de communication intercellulaire, dans un contexte normal en utilisant un tissu en cours de remodelage comme modèle. 1- Action des MV a) Sur les cellules inflammatoires : Nous traiterons des cellules mononuclées de sang avec des MV afin d'évaluer leur capacité à stimuler la différenciation, l'activation et la croissance des différentes populations de cellules immunitaires. Les molécules (protéines et miARN) à l'origine de ces mécanismes seront étudiées par utilisation d'anticorps neutralisant ou en inhibant la production de la molécule par les cellules. b) Sur l'apoptose : Dans le remodelage tissulaire, l'apoptose est fortement régulée que ce soit au niveau des cellules immunitaires, des cellules endothéliales ou mésenchymateuses. Les MV pourraient avoir un rôle protecteur dans l'apoptose cellulaire ou induire celle-ci. Des cellules endothéliales et mésenchymateuses et des macrophages seront traités avec différents inducteurs de l'apoptose en présence ou absence de MV et le taux d'apoptose induites sera évalué par fluorométrie et TUNEL. Les molécules (protéines et miARN) potentiellement à l'origine de l'action apoptotique dans les MV seront étudiées. 2- Etude de la diffusion des MV dans un tissu solide : Les MV détectées dans le sang proviennent cependant de cellules présentes dans les tissus solides. Inversement, les MV présentes dans le sang peuvent jouer un rôle sur les cellules des tissus. La diffusion des MV dans les tissus est cependant inconnue. a) Migration des MV à travers la barrière endothéliale : Notre hypothèse est que le passage des MV entre le sang et les tissus s'effectue au niveau des cellules endothéliales, et plus particulièrement au niveau du réseau lymphatique. Des cellules endothéliales sanguines ou lymphatiques seront cultivées dans des Transwell®. La modification de la perméabilité de l'endothélium par les MV sera évaluée avec du FITC-dextran. La transcytose et/ou la diminution des jonctions intercellulaires, seront étudiées par ajout d'inhibiteurs, par cytométrie en flux et immunohistologie. b) Devenir des MV dans les tissus solides : Notre hypothèse est que les MV peuvent se lier à la matrice extracellulaire. Des MV fluorescentes seront ajoutées sur un film de protéines matricielles, puis rincées avant observation. Le mécanisme de liaison sera étudié grâce à une dégradation enzymatique des protéines ou à l'ajout d'anticorps neutralisants. La diffusion des MV dans des gels de collagène ou de fibrine contenant des MV fluorescentes et des cellules sera évaluée au microscope à fluorescence Time lapse. Nous évaluerons la distance parcourue par les MV vers les cellules cibles et inversement. Les travaux proposés vont permettre de bien caractériser ce nouveau mode de communication entre les cellules dans les tissus.