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MeNAQ - Metal based Nucleic Acid Quantification

MeNAQ - 金属核酸定量

基本信息

批准号：
188751584
负责人：
Professor Dr. Michael Linscheid
金额：
--
依托单位：
Arbeitsgruppe Angewandte Analytik und Umweltchemie
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2011
资助国家：
德国
起止时间：
2010-12-31 至 2013-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/188751584?language=en
关键词：
MeNAQ Metal based Nucleic Acid

项目摘要

Ziel des Projektes ist die Entwicklung sensitiver Analysenverfahren die erlauben, Konzentrationen und Absolutmengen von Nukleinsäuren (DNA, RNA) sequenzspezifisch, hochempfindlich (bis in den attomol-Bereich) und multisimultan nachzuweisen. Diese Fragestellung ist u.a. in der Lebensmittelindustrie (Überwachung der Kontamination mit Krankheitserregern; Nachweis der Verwendung von gentechnisch veränderten Organismen, GVO), der klinischen Diagnostik (Nachweis von Infektionskrankheiten) bis hin zum Nachweis von Einzelnukleotidpolymorphismen (SNP) von herausragender Bedeutung. Momentan werden für diese Aufgabenstellungen fast ausschließlich die PCR (polymerase chain reaction) für den qualitativen und die qPCR (quantitative polymerase chain reaction) bzw. chipbasierte Hybridisierungsverfahren auf Farbstoffbasis für die Quantifizierung angewendet. Die Verwendung dieser Methoden bringt einige schwerwiegende Nachteile mit sich. So sind diese Techniken sehr zeitintensiv (bis zu mehreren Stunden Analysezeit) und erlauben nur eine sehr ungenaue Quantifizierung der Nukleinsäuren. Zusätzlich ist eine quantitative Bestimmung mit Hilfe dieser Methoden lediglich bezogen auf einen strukturell sehr ähnlichen bzw. gleichen Standard möglich. Die simultane Quantifizierung von mehreren Nukleinsäuren (Multiplexing) ist ebenfalls nur bedingt möglich. Mit dem von uns vorgeschlagenen Vorgehen auf der Basis der Metalldetektion sollen alle diese Einschränkungen erheblich reduziert oder gar aufgehoben werden. Grundlage für diese neue Nachweis- und Quantifizierungsmethode ist die Metallmarkierung von speziellen Sonden, die mit den Ziel-Nukleinsäuren spezifisch wechselwirken und nur dann ein Elementsignal in der Elementmassenspektrometrie (ICP-MS) auslösen, wenn eine Duplexstruktur gebildet wird. Ausgehend von dem von uns entwickelten MeCAT-Verfahren (Metal-coded Affinity Tag) für Proteine soll ein analoges System zur Analytik von Oligonukleotiden, DNA und RNA entwickelt werden.

Ziel des Projektes ist die Entwicklung sensitiver Analysenverfahren die erlauben, Konzentrationen and Absolutmengen von Nukleinsäuren (DNA， RNA) sequenzspezifisch, hochempfinlich （bis in den atom - bereich）和multisimultan nachzuweisen。（Überwachung der Kontamination mit krankheitserregen; Nachweis der Verwendung von gentechnisch veränderten Organismen， GVO）， der klinischen Diagnostik （Nachweis von Infektionskrankheiten) his hinzum Nachweis von Einzelnukleotidpolymorphismen (SNP) von herausragender Bedeutung）。快速聚合酶链式反应（ausschließlich die PCR）；定量聚合酶链式反应（qPCR）；chipbasierte Hybridisierungsverfahren auf Farbstoffbasis f8r die Quantifizierung angewenet。新方法带来了一种全新的创新，即创新与创新。因此，在Nukleinsäuren下，我们将研究如何提高技术强度和分析强度。Zusätzlich 1 .定量估计[m] . Hilfe - deer [m] . lediglich [m] . bezogen [m] . k] . ähnlichen bzw。gleichen标准möglich。Die simultane Quantifizierung von mehrelen Nukleinsäuren (Multiplexing) ist ebenfalls nubedingt möglich。Mit von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von von。Grundlage（德国）：新发现的Nachweis- and quantifizierungsmethod ist die Metallmarkierung von speziellen Sonden， die mit den Ziel-Nukleinsäuren spezifisch wechselwirken and nur dann in Elementsignal in der element mass - ms (ICP-MS) auslösen， weneine双结构（duplexstruckturr gebildet wind）。金属编码亲和标签（Metal-coded Affinity Tag） f<s:1> r protein solsolin analogk System zur Analytik von Oligonukleotiden， DNA和RNA entwickelt werden。