Bestimmung der Funktion und des Mechanismus des Transkriptionsfaktors NF-Y in der Biologie von hämatopoetischen Stammzellen

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Es ist bekannt, dass der Transkriptionsfaktor NF-Y viele Gene, die das Verhalten hämatopoetischer Stammzellen (HSZ) kontrollieren, stark induziert. Dies deutet darauf hin, dass NF-Y ein dominanter Regulator dieser Gene ist. Mit dem vorliegenden Projekt möchte ich die genaue Funktion von NF-Y in HSZ von Mäusen untersuchen. Um zu verhindern, dass die konditionalen knock-out Mäuse bereits im Embryonenstadium sterben, werde ich Mäuse generieren, denen funktionelles NF-Y lediglich im hämatopoetischen System fehlt. Der Schwerpunkt der Analyse wird darauf liegen, herauszufinden, ob normale Hämatopoese auch ohne NF-Y erfolgen kann. Besonders sollen dabei Signalwege untersucht werden, durch die NF-Y das Gleichgewicht zwischen Selbsterneuerung und Differenzierung hämatopoetischer Stammzellen regelt. Um den Mechanismus der beobachteten Effekte zu erklären, wird die Rolle von NF-Y bei der Regulierung potentieller Zielgene in Zellpopulationen untersucht werden, in denen hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen angereichert wurden. Diese in vivo Deletionsstudie wird durch in vitro Experimente mit 32D Zellen ergänzt, da diese Zellen viele Aspekte der Differenzierung hämatopoetischer Stammzellen modellieren. Wildtyp 32D Zellen, sowie einige mutierte 32D Zelllinien stehen mir zur Verfügung. Mit Hilfe dieser Zellen sollen sowohl die Regulationsebene als auch die zellulären Signaltransduktionswege, die in NF-Y vermittelter Regulierung eine Rolle spielen, bestimmt werden.