クロストリジウム細菌生産毒素の分子認識機構の解明

阐明梭菌产生的毒素的分子识别机制

• 批准号: 18K05469
• 负责人: 鵜沢 浩隆
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K05469/
• 关键词: 糖脂質; 合成; ガングリオシド; 検知チップ; 相互作用解析; ケモエンザイム合成; 固定化; リガンド; 細菌性毒素; 認識; ライブラリー

本研究では、Clostridium botulinumの生産する蛋白性神経毒素（以下、BTXとする）と各種合成糖脂質との相互作用を検証することを目的としている。昨年度までに、7糖GT1b-TOA、5糖GM1-TOA、2糖Lac-TOA、1糖Glc-TOAの各糖脂質誘導体を金表面に固定化を行い、これらの検知チップを用いて、単一分子量 (300kDa)の毒素実剤BTX/Eについて、水晶振動子マイクロバランス法（QCM）による結合評価を行った。本年度は、単一分子量 (51kDa)の神経毒素重鎖(BTX/A/Hc)を用い、GT1b-TOA、GM1-TOA、Lac-TOA、Glc-TOAとの結合相互作用について検証した（TOAはリポ酸を意味する）。まず、４種類の合成糖脂質Glc-TOA、Lac-TOA、GM1-TOA、及び、GT1b-TOAを、各々、センサ基板の金表面に自己集積化膜（SAM）法により固定化した。同様にして、SAM法により、検知チップのレファレンス側にHOEG6C11SHを固定化した。遺伝子組換え体重鎖BTX/A/Hcを用い、Glc-TOA、Lac-TOA、GM1-TOA、GT1b-TOAを固定化した各検知チップについて、30 MHz QCMによる結合評価を行った。200ngのBTX/A/Hcを注入した時、Glc-TOA、及び、GT1b-TOAでは、各々、7.3 Hz、5 Hzの周波数減少が認められた。一方、Lac-TOA、GM1-TOAでは、周波数減少は見られなかった。本実験で使用したBTX/A/Hcには、タンパク安定化のため過剰量のラクトースを含有しているため、結合阻害している可能性がある。今後は、ラクトースを除去した試料を調製して再評価を行う。

The purpose of this study was to investigate the interaction between Clostridium botulinum and Clostridium botulinum, a proteinaceous neurotoxin (hereinafter referred to as BTX), and various synthetic glycolipids. Last year, each glycolipid inducer of the year, 7-glucose GT1b-TOA, 5-glucan GM1-TOA, 2-glucan Lac-TOA, and 1-glucan Glc-TOA, was immobilized on the gold surface, and the glucolipid derivatives were immobilized on the gold surface. (300kDa) BTX/Eについて, crystal oscillator マイクロバランス method (QCM) combined evaluation 価を行った. This year's unit molecular weight (51kDa) BTX/A/Hc binding interaction, GT1b-TOA, GM1-TOA, Lac-TOA, Glc-TOA binding interaction, TOA acid, etc.まず, 4 kinds of synthetic glycolipids Glc-TOA, Lac-TOA, GM1-TOA, and び, GT1b-TOAを, each 々, センサ substrate, のgold surface, self-assembly membrane (SAM) method, により immobilization した. Same as 様にして, SAM method により, 検知チップのレファレンスlateral HOEG6C11SHをimmobilization method. The remaining body weight lock BTX/A/Hc is suitable for use, Glc-TOA, Lac-TOA, GM1-TOA, GT1b-TOA and is fixed, and each one has a fixed body weight, 30 MHz QCMによるcombination evaluation価を行った. When 200ng of BTX/A/Hc was injected, Glc-TOA, Glc-TOA, GT1b-TOA, each, 7.3 Hz, and 5 Hz, the number of cycles was reduced. One side, Lac-TOA, GM1-TOA, and reduced frequency. This article uses BTX/A/Hc には, タンパク stabilized のためpass The amount of のラクトースを contains the しているため, and the possibility of combining the hindrance しているがある. From now on, we will remove the samples and prepare the samples and then evaluate the results again.

项目成果

Silicon nitride sugar chips for detection of Ricinus communis proteins and Escherichia coli O157 Shiga toxins

用于检测蓖麻蛋白和大肠杆菌 O157 志贺毒素的氮化硅糖芯片

• DOI: 10.1016/j.ab.2019.06.002
• 发表时间: 2019
• 期刊: Analytical Biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Daiki Tanaka;Hirotaka Uzawa;Takehiro Nagatsuka;Yuki Oba;Atsunori Hiratsuka;Ken-ichi Tayama;Toshio Yoshida;Yasuo Seto;Hirofumi Dohi;Yoshihiro Nishida
• 通讯作者: Yoshihiro Nishida

Silicon Nitride Chips Modified with Gb3 Trisaccharide for Rapid Detection of Verotoxins

Gb3 三糖修饰的氮化硅芯片用于快速检测维罗毒素

• 发表时间: 2019
• 作者: Hirotaka Uzawa;Atsunori Hiratsuka;Yasuo Seto;Ken-ichi Tayama;Toshio Yoshida;Yoshihiro Nishida
• 通讯作者: Yoshihiro Nishida

ケモエンザイム法による糖脂質ライブラリーの構築

化学酶法糖脂文库构建

• 发表时间: 2019
• 作者: 鵜沢浩隆;平塚淳典
• 通讯作者: 平塚淳典

非特異的吸着抑制効果の高い糖鎖リガンド、および該糖鎖リガンドを固定化した毒素検知チップ

一种具有高非特异性吸附抑制效果的糖链配体及固定有该糖链配体的毒素检测芯片

• 发表时间: 2020