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哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼBの解析

哺乳动物细胞 DNA 复制中 DNA 解旋酶 B 的分析

基本信息

批准号：
09780619
负责人：
関政幸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780619/
关键词：
DNA複製 DNAヘリカーゼB PCNA 温度感受性変異株 Replication Foci

项目摘要

マウス温度感受性変異株tsFT848細胞は、非許容温度でDNA複製低下及びDNAヘリカーゼB活性の低下が観察される。初年度ではヘリカーゼBがtsFT848細胞の温度感受性の真の原因遺伝子か決定する実験を行い、直接の原因であることをほぼ確定できた。本年度は、ヘリカーゼBがいつ・どこで・誰とDNA複製に関与するか特定することを試みた。1) WHEN:DNAヘリカーゼBに対する抗体とReplication Forkに常に存在することが知られるPCNAに対する抗体を用いて、2者の関係を間接免疫2重染色法を用いて解析した。GO期でもDNAヘリカーゼBは核内にすでに存在するが、PCNAはS期に入ってからDNAと安定に複合体を形成することがわかった。2) WHERE:PCNAとDNAヘリカーゼBはReplication Site(RS)で常に挙動をともにするわけではなく、PCNAと局在が一致するものもあればいないものもある。以上を総合すると、ヘリカーゼBはPCNAよりは先にRSに入りDNA複製の開始に影響を与えうるが、その後Replication Forkから解離すると考えられる。3) WHO:two-hybridスクリーニングにて、ヘリカーゼBと相互作用する候補としてG/Tmismatch specific tymine DNA glycosylaseをクローニングした。G/TミスマッチはReplication Forkの通過前に修復される必要があり、DNA複製の開始付近で働くDNAヘリカーゼBとの相互作用は、ゲノムの配列の維持に重要な意味をもつ可能性がでてきた。

Temperature sensitivity, tsFT848 cell, non-volumetric temperature, low DNA replication and low B activity were observed. At the beginning of the year, the temperature sensitivity of B tsFT848 cells was determined by the true cause, and the direct cause was confirmed. This year, this year, you will need to learn more about DNA replication and this year. You will need to use a specific copy of the database to try to do so. 1) WHEN:DNA antibody B antibody Replication Fork antibody often exists. The antibody is known to be PCNA antibody. The antibody is used. The double staining method of immune double staining is used. In the GO phase, there is a complex of DNA diazepam in the nuclei of the GO phase, and there is a virus in the nuclei of the PCNA phase S. 2) the WHERE:PCNA