ヒト細胞の遺伝子のノツクアウトの高効率化への挑戦的研究

提高人类细胞基因敲除效率的挑战性研究

• 批准号: 21657042
• 负责人: 関 政幸
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657042/
• 关键词: クロマチン; ヒストン; 相同組換え; DNA修復; CAF-1; 出牙酵母; アセチル化; ヌクレオソーム; Swr1; ヒストンバリアントH2A.Z; 出芽酵母

真核細胞のDNAは、H2A-H2B二量体とひとつのヒストン(H3-H4)_2四量体からなるヒストン八量体に巻き付き、ヌクレオソーム構造をとる。ヌクレオソーム構造は相同組換え反応を含めた様々なDNA介在反応を負に制御している。従って、相同組換えを利用した遺伝子のノックアウトの高率化において、組換え反応時のヌクレオソームの制御機構を理解し、その原理をノックアウトの高率化に応用することは重要である。申請者は、昨年度の実績としてヒストンのアミノ酸を個々にアラニンに置換した酵母の点突然変異株ライブラリー439株の解析を行ない、相同組換えに欠損がありそうな90株のMMS感受性点変異株を同定していた(Genes Cells 14,1271-1330,2009)。この中から、MMS感受性を示す、H3-K56A変異株に焦点あてた。H3-K56はアセチル化(H3-K56-Ac)されることが知られていたが、本研究でH3-K56-Acに依存して、相同組換えの一種である姉妹染色分体間の組換え(SCR)が起ることをはじめて見いだした(GEnes Cells 15,945-958,2010)。興味深いことに、DNAヘリカーゼSgslの欠損あるいはヒストンシャペロンCAF-1の欠損により、それぞれSCRが野生株に比べて亢進することを見いだした。さらにCAF-1とSgslの同時欠損酵母細胞ではSCRが相乗的に頻発した。これは、ヒト細胞でCAF-1とSgslの相同遺伝子を同時に低下させることで、ヒト細胞に高効率のノックアウトを実現できる可能性を示したものといえる。

DNA of eukaryotic cells, H2A-H2B binary body of DNA (H3-H4 )_2 The four-dimensional body is the same as the eight-dimensional body, and the structure is the same. The structure of the ヌクレオソーム is the same as the combination of the reverse reaction and the DNA intermediary of the reaction and negative control.従って, the same group replacement is used, the same group is replaced, the group is replaced, and the group is replaced. It is important to understand the control mechanism of the control mechanism and the high-efficiency use of the principle of the control. The applicant's last year's performance was a sudden change of the different strains of the yeast ライブラリー4 39 strains are analyzed and analyzed, and the same group is replaced and damaged, and 90 strains have MMS susceptibility points. Cells 14, 1271-1330, 2009).この中から, MMS sensitivities をshow す, H3-K56A 剉different strains にfocus あてた. H3-K56 H3-K56-Ac (H3-K56-Ac) H3-K56-Ac H3-K56-Ac Save して、Same group replacement えのkind であるSister chromatic separation の group replacement え(SCR)が开ることをはじめて见いだした(GEnes Cells 15, 945-958, 2010). The interest is deep, the DNA is deep, and the DNA is missing. F-1's lack of damage and wild strains of SCR are better than those of F-1's wild strains. It is a combination of CAF-1 and Sgsl that simultaneously damages yeast cells and SCR.これは、ヒトcellでCAF-1とSgslの Same legacy 伝子をsimultaneously low させることThe possibility of high efficiency of で, ヒト cells is shown in the present できる.

项目成果

Analysis of DNA replication repression by excess Cdt1

过量 Cdt1 对 DNA 复制抑制的分析

• 发表时间: 2009
• 作者: Sasaki M;Hamada K;Kawahara K;Sasaki T;Maehama T;Suzuki A;大隅達也;牛田磨理
• 通讯作者: 牛田磨理

Repression of nascent strand elongation by deregulated Cdtl during DNA replication in Xenopus egg extracts.

非洲爪蟾卵提取物 DNA 复制过程中 Cdtl 失调对新生链伸长的抑制。

• 发表时间: 2009
• 期刊: MoL BioL Cell 20
• 作者: Tsuyama T;Watanabe S;Aoki A;Cho Y;Seki M;Enomoto T;Tada S
• 通讯作者: Tada S

The N-terminal region of RECQL4 lacking the helicase domain in both essential and sufficient for the viability of vertebrate cells.

RECQL4 的 N 末端区域缺乏对脊椎动物细胞的活力来说必需且充分的解旋酶结构域。

• 发表时间: 2010
• 作者: 吉村明;阿部拓也;多田周右;関政幸;榎本武美
• 通讯作者: 榎本武美

Nuclear superoxide may trigger spontaneous sister chromatid exchanges(招待講演)

核超氧化物可能引发自发姐妹染色单体交换（特邀演讲）

• 发表时间: 2009
• 作者: Eri Inoue;Keizo Tano;Hanako Yoshii;Syunya Takada;Akari Yoshimura;Nawata Hisakatsu;Jun Nakamura;Shusuke Tada;Masami Watanabe;Masayuki Seki;Takemi Enomoto
• 通讯作者: Takemi Enomoto

SOD1 Is Essential for the Viability of DT40 Cells and Nuclear SOD1 Functions as a Guardian of Genomic DNA

• DOI: 10.4061/2010/795946
• 发表时间: 2010-01-01
• 期刊: JOURNAL OF NUCLEIC ACIDS
• 影响因子: 2.3
• 作者: Inoue, Eri;Tano, Keizo;Enomoto, Takemi
• 通讯作者: Enomoto, Takemi