ヒト細胞遺伝子のノックアウトの高効率化のための萌芽的研究

人类细胞基因高效敲除的探索性研究

• 批准号: 18657053
• 负责人: 関 政幸
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657053/
• 关键词: 相同組換え; Ino80; Arp4; Arp6; Swr1; Rad52; NHEJ; CAF-1; ChIP; 出芽酵母; 標的組換え; ヒストン

1)出芽酵母Arp6は組換えの抑制に関わる;Swr1複合体のサブユニットarp6変異株で組換えが亢進することを論文発表した(Kawashima et al.,2007)。2)出芽酵母を用いた、相同組換えのクロマチンレベルでの抑制機構の解明;sgs1変異株において相同組換えの亢進(swr1株よりも亢進の程度は低い)が観察される。ここで、swr1-sgs1二重変異株を作製して、今までに報告のない高い頻度の組換えが起るかどうかを調べたが、予想に反してそうはならなかった。一方、複製にカップルしてヌクレオソームの形成に関わるCAF-1とSgs1の同時欠損において、相乗的な姉妹染色分体間の組換えの亢進を見いだした。3)ヒトNalm6細胞を用いた、高効率の遺伝子破壊法の確立;ヒトNalm6細胞はB細胞由来の細胞株で、比較的標的遺伝子の破壊の効率が良い細胞として知られ、既に幾つかの遺伝子破壊株の作製とその解析が報告されている。そこでSWR1とBLMの両遺伝子の発現を同時に抑制させるsiRNAをNalm6細胞に導入し、その条件下で標的遺伝子の破壊効率の測定を行う予定だったが、出芽酵母swr1-sgs1株でhyper-recombinationの表現型が観察されなかったため中断した。その代わりニワトリDT40細胞でCAF1およびBLMのノックアウト細胞が確立しているのを利用し、DT40 BLM-CAF1二重遺伝子破壊株を作製している。この株を用いて、標的遺伝子破壊の上昇を確かめ、その後Nalm6系への応用を想定して実験を進めている。

1) The budding yeast Arp6 group is suppressed and suppressed; the Swr1 complex is suppressed and the arp6 is heterogeneous and the group is replaced and promoted and the paper is expressed (Kawashima et al. al., 2007). 2) Explanation of budding yeast's inhibitory mechanism using the same combination of えのクロマチンレベルでの; sgs1 The same group of different strains of において is replaced by えの Hyper (swr1 strain of よりも Hyper の Degree は Low い) が観看される.ここで, swr1-sgs1 二重剉 Same strain を燗て, 日本までにreport のない高いThe combination of frequency and frequency is changed by えが开るかどうかを动べたが, and I think of the reverse してそうはならなかった. One side, copying the にカップルしてヌクレオソームの成に关わるCAF-1とSgs 1のsimultaneously lacks the において, and the multiplied なsister chromatic separate のcombination exchange えの Hyperactivity を见いだした. 3) Establishment of high-efficiency sterilization method for Nalm6 cells; Comparison of Nalm6 cells and cell lines derived from B cells The target of the target is the efficiency of the cell and the analysis of the cell and the analysis of the target. The detection of SWR1 and BLM and the simultaneous inhibition of the introduction of siRNA into Nalm6 cells and the measurement of the target's destruction efficiency under these conditions The budding yeast swr1-sgs1 strain has a hyper-recombination phenotype, a budding yeast swr1-sgs1 strain, and a hyper-recombination phenotype.その代わりニワトリDT40 cell でCAF1 およびBLM のノックアウトcell がEstablishment しているのをutilizationし、DT40 BLM-CAF1 Dual Relic 伝子棊子棊把区をproduced by している.この strain を Use い て, the target remains 伝子波壊のrise を Indeed かめ, and その后Nalm6 series への応用 を suppose し て実験を 入めている.

项目成果

Analyses of functional interaction between RECQLI, RECQL5, and BLM which physically interact with DNA tonoisomerase IIIa

分析 RECQLI、RECQL5 和 BLM 之间的功能相互作用，这些相互作用与 DNA tonoisomerase IIIa 发生物理相互作用

• 发表时间: 2008
• 期刊: Bioehim. Biophys. Acta. 1782
• 作者: Otsuki M;Seki M;Inoue E;Abe T;Narita Y;Yoshimura A;Tada S;Ishii Y;Enomoto T
• 通讯作者: Enomoto T

Bloom helicase and DNA topoisomerase IIIα are involved in the dissolution of sister chromatids

• DOI: 10.1128/mcb.00702-06
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Seki, Masayuki;Nakagawa, Takayuki;Enomoto, Takemi
• 通讯作者: Enomoto, Takemi

WRN counteracts the NHEJ pathway upon camptothecin exposure

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2007.01.175
• 发表时间: 2007-04-06
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Otsuki, Makoto;Seki, Masayuki;Enomoto, Takemi
• 通讯作者: Enomoto, Takemi

Actin-related protein Arp4 functions in kinetochore assembly.

• DOI: 10.1093/nar/gkm161
• 发表时间: 2007
• 期刊: Nucleic acids research
• 影响因子: 14.9
• 作者: Ogiwara H;Ui A;Kawashima S;Kugou K;Onoda F;Iwahashi H;Harata M;Ohta K;Enomoto T;Seki M
• 通讯作者: Seki M

Vertebrate WRNIPI and BLM are required for efficient maintenance of genome stability

脊椎动物 WRNIPI 和 BLM 是有效维持基因组稳定性所必需的

• 发表时间: 2008
• 期刊: Genes Genet. Syst. 83
• 作者: Hayashi T;Seki M;Inoue E;Yoshimura A;Kusa Y;Tada S;Enomoto T
• 通讯作者: Enomoto T