家禽の換羽を支配するホルモン機構に対する分子生物学的アプローチ

控制家禽蜕皮的激素机制的分子生物学方法

• 批准号: 10760160
• 负责人: 岩澤 淳
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760160/
• 关键词: 家禽; 甲状腺刺激ホルモン; 換羽; COS細胞

本研究は、家禽の換羽を制御するホルモン機構について、実用的な測定方法がないためにこれまで全く解明されていなかった甲状腺刺激ホルモン(TSH)の関与に関して重点的に検討し、併せて他のホルモンとの相互作用についても明らかにしようとするものであり、研究手法としては主に生化学的手法を用いることとした。昨年度までに、RT-PCR法によるTSHβサブユニットmRNAの定量法を確立し、強制換羽を行ったニワトリの下垂体におけるTSHβサブユニットmRNA、およびステロイドホルモンや下垂体ホルモンの定量を行って、それぞれ興味深い結果を得た。また、TSHβサブユニットに対する抗ペプチド抗体の作成を行い、免疫組織化学およびイムノブロッティングの実験系を確立した。今年度は換羽を行ったニワトリのTSHをより簡便に定量するために、イムノアッセイ系の開発を検討し、時間分解蛍光イムノアッセイを用いたサンドイッチ法による特異的定量法を確立した。この方法はβサブユニットに対する抗体をプレートに固相化し、αサブユニットに対する抗体を蛍光標識して、TSHのそれぞれのサブユニットに結合させて定量するものである。この系は予想したより感度が悪く、血液中のTSHの定量には向かないことがわかったが、下垂体中のTSH量を測る目的には十分であった。さらに高感度なイムノアッセイ系を確立する目的で、COS細胞に遺伝子を導入してTSHαおよびβサブユニットの共発現を行った。この結果、TSHタンパク質が発現したが、細胞内にとどまって培地に分泌されなかった。このため、分泌を行うためのシグナル配列を検討するなどして、組換え体TSHの大量発現と、これを用いた抗体の作成を目指した検討を行った。

This study focuses on the mechanism of molting control in poultry, the measurement methods used, and the application of biochemical methods. The quantitative method of TSH β mRNA was established by RT-PCR method in the past year, and the quantitative results of TSH β mRNA, TSH β mRNA and TSH β mRNA in the pituitary gland of stress molting were obtained. The preparation of anti-TSH antibodies and the establishment of an immunohistochemical system This year's annual survey was conducted on the basis of a simple quantitative method. The method includes solid-phase, α-phase and TSH binding of antibodies. This is the first time that we've seen TSH in the blood, and the second time that we've seen TSH in the pituitary. For the purpose of establishing a high sensitivity gene system, COS cells are introduced into TSHα-and β-cells and co-produced. As a result, TSH is secreted in cells. A large number of TSH were produced and used in the production of antibodies.

项目成果

Iwasawa,A.: "Production of an anti-peptide antibody against the TSH β subunit of chicken/Japanese quail." Biotechnology,Agronomy Society and Environment. Vol.2・Special issue. 59-59 (1998)

Iwasawa, A.：“针对鸡/日本鹌鹑 TSH β 亚基的抗肽抗体的生产”，《生物技术》、《农学学会和环境》第 2 卷·特刊（1998 年）。