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PCR法を用いたスポロトリコーシスのDNA診断法の確立

PCR法建立孢子丝菌病DNA诊断方法

基本信息

批准号：
10770418
负责人：
杉田泰之
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770418/
关键词：
Sporothrix schencku DNA診断 PCR法プライマー DNA抽出 Sporothrix schenckii

项目摘要

皮膚の深在性真菌症であるスポロトリコーシスの、PCR法による実用的なDNA診断法を確立するため、より適切なプライマーの設定を行ない、関連操作の改善を試みた。まず、スポロトリコーシスの原因菌であるSporothrix schenckiiは、ミトコンドリアDNAの制限酵素解析によって少なくとも10数種類以上の遺伝子多型を有することが知られている。そこで、ATCC No.14284の菌株からDNA断片を分離し、複数の菌株で配列を比較し、多数の株に共通で、他の生物とは類似しない遺伝子にプライマーの設定を試みた。その結果、予備的に設定したプライマーでは30菌株中14株(46.7%)菌株でDNAの増幅がみられたのに対し、複数の菌株の塩基配列を考慮して作製したプライマーは、75菌株中69株(92%)でDNAの増幅が確認された。そして、その後さら多くの塩基配列を検討した。次に、実用上の感度向上のため、微量かつ強固な真菌から確実にDNAを抽出する方法を検討した。まず、Zymolyaseやlyticase等の複数の酵素について、スライドカルチャー上の菌体への作用を観察した結果、酵素処理だけでは細胞壁の十分な破壊は困難であると結論した。そして、物理的な破砕と酵素処理を組み合わせ、固い皮膚組織中の、極めて微量の胞子型の菌体から確実にDNAを抽出する方法が必要と考えられた。以上の結果を統合することで、より実用的なスポロトリコーシスのDNA診断法が可能であると考えられた。

DNA diagnosis of deep-seated fungal disease using PCR method The method is established and the operation is improved and the related operations are improved and tested. Sporothrix schenckiiは、ミトコンドリアDNA restriction enzyme analysisによって小なくともMore than 10 types of leftover polytypesを有することが知られている.そこで、ATCC Isolation of DNA fragments of strain No.14284, comparison of arrangement and arrangement of plural strains, Most of the strains have something in common, and other creatures are similar to the しない弝子にプライマーのsettingをtrialみた. The result of the preparation and the preparation of the set of したプライマーでは 14 strains (46.7%) of the 30 strains were extracted from the DNA of the がみられたのに対し, The base arrangement of the plural strains was considered and the production was done. Among the 75 strains, 69 strains (92%) were confirmed by DNA amplification.そして, その后さら多くの塩组组を検多した. Secondly, use the high sensitivity and strengthen the fungus in a trace amount and extract the DNA using the method.まず、Zymolyaseやlyticase and other enzymes in the plural The results of the observation of the effects of the bacterial cells and the conclusion of the enzyme treatment of the cell wall are very difficult and difficult.そして, physical breaking and enzyme treatment, combination of み合わせ, solid い skin tissue, extremely めて trace amount of spore type の bacteria から confirmed のにDNA extraction する method is necessary and とえられた. The above results are based on the DNA diagnosis method used by the integrated DNA diagnostic method used by the company and the company.