DNA診断法によるブロイラー孵化鶏卵のカンピロバクター汚染の検討

DNA诊断法检测肉鸡孵化鸡蛋的弯曲杆菌污染

• 批准号: 07760304
• 负责人: 中馬 猛久
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760304/
• 关键词: カンピロバクター; ブロイラー; PCR; 孵化鶏卵

Campylobacter jejuniは食中毒起因菌として公衆衛生学上の意義は大きいとされている。一般に、この食中毒の原因食品の特定は困難であるとされているが、最も有力な感染源として鶏卵が重要視されている。ブロイラー農場における出荷時には多くの鶏が腸内にC.jejuniを保菌していることが知られているが、ブロイラーが保菌するに至る要因は解明されていない。これは、本菌を培養検査したのでは、鑑別のために生化学的性状検査に煩雑な操作と長時間を要し、また、環境試料などの低濃度汚染源を調べる上での感度が充分でないことによるものと考えられる。一方、近年、いくつかの菌種でDNAを用いた同定法が開発され、その有用性が確認されている。そこで、鶏糞便中のC.jejuniを迅速かつ特異的に検出することを目的としてPCR法とサザンブロットハイブリダイゼーション(SBH)法を応用してブロイラーおよび発育鶏卵のC.jejuniによる汚染状況を調査した。C.jejuniを保菌していない雛の糞便に菌を混合したサンプルからDNAを抽出してPCR法とSBH法を実施し感度を測定したところ、それぞれ3.4x10^4CFU/ml、3.4X10^2CFU/mlの菌を検出することができた。孵化場から18日齢の発育鶏卵を得て、その盲腸内容物中のC.jejuni DNAを検索した。18日齢の発育鶏卵を約1,000倍に希釈した塩化ベンザルコニウム液に30分浸し無菌的に卵を割って胚を取り出し盲腸を摘出した。その盲腸の内容物中からDNAを上述の方法で抽出してPCRとSBHを実施した結果、PCR法ではすべて陰性であったがSBH法では51例中2例がC.jejuni陽性を示した。これらのサンプルを雑菌培養しても菌は分離されなかったことから、増殖可能な状態で菌が盲腸内に生息し以後の菌の伝播や拡散において何らかの役割を担っているか否かは不明であったが、この成績から、18日齢の発育鶏卵の盲腸内にC.jejuniのDNAが既に存在している場合があると考えられた。

Campylobacter jejuni <s:1> the cause of food poisoning is と て て. In public health, it is of great <s:1> significance <e:1> and とされて とされて る. General に, こ の の causes food poisoning food の specific は difficult で あ る と さ れ て い る が, the most powerful な も infection source と し て 鶏 eggs が important visual さ れ て い る. ブ ロ イ ラ ー farm に お け る out when に は more く の 鶏 が intestinal に SAN Antonio ejuni を protect bacteria し て い る こ と が know ら れ て い る が, ブ ロ イ ラ ー が protect bacteria す る に to は る will interpret さ れ て い な い. こ れ は, this bacterium を cultivate 検 し た の で は, differential の た め に 検 check of the characteristics of biochemistry に vexed 雑 な operation と long を し, ま た, environmental sample な ど の low concentration pollution を べ る on で の sensitivity が fully で な い こ と に よ る も の と exam え ら れ る. One party, in recent years, い く つ か の strains で DNA を with い た with optional が open 発 さ れ, そ の usefulness が confirm さ れ て い る. そ こ で, 鶏 faeces の SAN Antonio ejuni を quickly か つ specific に 検 out す る こ と を purpose と し て PCR method と サ ザ ン ブ ロ ッ ト ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン method (SBH) を 応 with し て ブ ロ イ ラ ー お よ び 発 yukon 鶏 eggs の SAN Antonio ejuni に よ る pollution を survey し た. SAN Antonio ejuni を protect bacteria し て い な い cheeper の fecal bacteria に を mixed し た サ ン プ ル か ら を DNA extraction し て PCR method と を SBH method be applied し sensitivity determination of を し た と こ ろ, そ れ ぞ れ 3.4 x10 ^ 4 cfu/ml, 3.4 x10 ^ 2 cfu/ml の bacteria を 検 out す る こ と が で き た. On the 18th day of 齢 ら at the hatchery, 齢 齢 developed 鶏 eggs を obtained て and そ in the cecal contents of <s:1> C.jejuni DNAを検 obtained た. 18 齢 の 発 yukon 鶏 eggs を about 1000 times に bush 釈 し た salt chemical ベ ン ザ ル コ ニ ウ ム leaching し sterile liquid に : 30 に eggs を cut っ て embryo を take り out し cecum を pick out し た. そ の の contents in the cecum か ら DNA を の way above で spare し て PCR と SBH を be applied し た results, PCR method で は す べ て negative で あ っ た が SBH method で は 51 cases, 2 cases of が SAN Antonio ejuni positive を shown し た. こ れ ら の サ ン プ ル を 雑 culture し て も bacteria separation は さ れ な か っ た こ と か ら, raised colonization may で bacteria が な state within the cecum に interest-bearing し の bacteria after の 伝 sowing や company, scattered に お い て what ら か の "を cut bear っ て い る か no か は unknown で あ っ た が, こ の grades か ら, 18 齢 の 発 yukon 鶏 egg の appendix に SAN Antonio ejuni の が DNA There is a situation where に tests えられた when に て る る る.