平滑筋の発生・分化に関する研究

平滑肌发育和分化的研究

基本信息

批准号：
09770075
负责人：
高宮考悟
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

まず、現在までにES細胞を用い神経、骨格筋細胞への分化系培養が報告されているため、これを参考とし平滑筋細胞への分化系培養を試みた。一定期間細菌培養用ペトリデッシュにて浮遊培養(aggregation culture)を行った後、細胞を通常の細胞培養用ペトリデッシュへ移し接着させた。その後、数日の培養を行い、各種平滑筋細胞のマーカー蛋白質に対する抗体を用い、ウエスタン解析と細胞染色を行い結果を検討した。この培養期間中、各stageの培養時間や、分化刺激として添加するretinoic acid,DMSO等の添加時期、濃度等の条件を検討した。その結果、低濃度のretinoic acidを用いることにより多くの細胞が平滑筋細胞のマーカー蛋白である平滑筋型α-アクチンを発現することがわかり、他のマーカー蛋白質もin vivoの発生における時間的な発現様式に従い発現していることがわかった。また、発生初期に発現が見られる中胚葉のマーカー遺伝子もRT-PCRを用い検出されたことより、ES細胞を平滑筋初期発生の研究モデルとして使用することが適当と思われる結果が得られた。しかし、それらの発現量や、分化型平滑筋細胞のマーカー蛋白質であるカルデスモンは、1-型を示していた。また、一部には平滑筋の形質を示さない細胞も混在しているため、なおこの細胞培養系において細胞のcloningを含め改良が必要であると考えらた。現在、各種培地、添加剤等の検討を行っている。また発生した平滑筋細胞が、確かに完全に分化した状態のものであるか、生理学的機能を含め検討中である。

首先，由于据报道使用ES细胞的分化系统培养物用于区分神经和骨骼肌细胞，因此我们尝试使用此作用将其分化为平滑肌细胞。在彼得里德（Petridesh）进行细菌培养的一定时间段内进行聚集培养后，将细胞转移到彼得里德什（Petridesh）以进行正常细胞培养并粘附。之后，将结果培养几天，并使用针对各种平滑肌细胞的标记蛋白的抗体进行西方分析和细胞染色。在此培养期间，检查了诸如每个阶段的培养时间，添加视黄酸，DMSO等的时间，以作为分化刺激添加和浓度。结果表明，通过使用低浓度的视黄酸，许多细胞表达平滑肌型α-肌动蛋白，一种用于平滑肌细胞的标记蛋白，并且其他标记蛋白也根据体内发育中的时间表达模式表达。此外，还使用RT-PCR检测到在发育早期表达的中胚层标记基因，从而发现将ES细胞用作早期发展平滑肌的研究模型是合适的。但是，它们的表达水平和Caldesmon是一种用于分化平滑肌细胞的标记蛋白，表现出1型型。此外，由于某些细胞没有表现出平滑肌性状，因此我们认为在此细胞培养系统中需要改进，包括细胞克隆。目前，正在研究各种媒体，添加剂等。此外，生成的平滑肌细胞是否确实处于完全不同的状态，并且生理功能目前正在研究中。