平滑筋の発生・分化に関する研究

平滑肌发育和分化的研究

• 批准号: 09770075
• 负责人: 高宮 考悟
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770075/
• 关键词: 平滑筋細胞; ES細胞; 初期発生; 中胚葉; 分化; 平滑筋型α-アクチン; カルデスモン

まず、現在までにES細胞を用い神経、骨格筋細胞への分化系培養が報告されているため、これを参考とし平滑筋細胞への分化系培養を試みた。一定期間細菌培養用ペトリデッシュにて浮遊培養(aggregation culture)を行った後、細胞を通常の細胞培養用ペトリデッシュへ移し接着させた。その後、数日の培養を行い、各種平滑筋細胞のマーカー蛋白質に対する抗体を用い、ウエスタン解析と細胞染色を行い結果を検討した。この培養期間中、各stageの培養時間や、分化刺激として添加するretinoic acid,DMSO等の添加時期、濃度等の条件を検討した。その結果、低濃度のretinoic acidを用いることにより多くの細胞が平滑筋細胞のマーカー蛋白である平滑筋型α-アクチンを発現することがわかり、他のマーカー蛋白質もin vivoの発生における時間的な発現様式に従い発現していることがわかった。また、発生初期に発現が見られる中胚葉のマーカー遺伝子もRT-PCRを用い検出されたことより、ES細胞を平滑筋初期発生の研究モデルとして使用することが適当と思われる結果が得られた。しかし、それらの発現量や、分化型平滑筋細胞のマーカー蛋白質であるカルデスモンは、1-型を示していた。また、一部には平滑筋の形質を示さない細胞も混在しているため、なおこの細胞培養系において細胞のcloningを含め改良が必要であると考えらた。現在、各種培地、添加剤等の検討を行っている。また発生した平滑筋細胞が、確かに完全に分化した状態のものであるか、生理学的機能を含め検討中である。

を ま ず, now ま で に ES cells with 経 い god, skeletal muscle cells へ の differentiation of cultivating が report さ れ て い る た め, こ れ を reference と し smooth muscle cells へ の differentiation of cultivating を try み た. Bacterial culture for a certain period of time with ペ ト リ デ ッ シ ュ に て floating culture (aggregation culture) line を っ た after cell culture, cell を の usually use ペ ト リ デ ッ シ ュ へ move し then さ せ た. Line, a few days after そ の の cultivate を い, all kinds of smooth muscle cells の マ ー カ ー protein に す seaborne る antibody を い, ウ エ ス タ ン parsing と cell line dyeing を い results を beg し 検 た. During the <s:1> <s:1> culture period, the <s:1> culture time of each stage や, differentiation stimulation と て て addition するretinoic acid,DMSO, etc., the <s:1> addition period, concentration and other <s:1> conditions を検 should be explored for た た. そ の results, low concentration の retinoic acid を with い る こ と に よ り more く の が smooth muscle cells の マ ー カ ー protein で あ る smooth muscle type alpha ア ク チ ン を 発 now す る こ と が わ か り, he の マ ー カ も ー protein in The な occurrence pattern of the における occurrence time of the vivo cue に従 the における occurrence て the て る とがわ とがわ とがわ った った. ま た, 発 born early に 発 が now see ら れ る mesoderm の マ ー カ ー posthumous son 伝 も rt-pcr を with い 検 out さ れ た こ と よ り, ES cells born early を smooth muscle 発 の research モ デ ル と し て use す る こ と が と think appropriate わ れ る results ら が れ た. し か し, そ れ ら の 発 now や, differentiated smooth muscle cells の マ ー カ ー protein で あ る カ ル デ ス モ ン は, 1 - type を し て い た. ま た, a に は smooth muscle の character を shown さ な も い cells mixed with し て い る た め, な お こ の cell culture system に お い の て cell cloning を containing modified が め necessary で あ る と exam え ら た. Now, various cultivators, additives, etc. 検 検 discuss を line って る る. ま た 発 raw し た が, smooth muscle cells were か に completely に differentiation し た state の も の で あ る か, physiology function を contain め 検 beg in で あ る.

项目成果

Kawashima M.: "Differential expression of isoforms of PSD-95 binding protein (GKA/SAPAP1) during rat brain development." FEBS Lett.418. 301-304 (1997)

Kawashima M.：“大鼠大脑发育过程中 PSD-95 结合蛋白 (GKA/SAPAP1) 亚型的差异表达。”