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平滑筋の発生・分化に関する研究

平滑肌发育和分化的研究

基本信息

批准号：
09770075
负责人：
高宮考悟
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

まず、現在までにES細胞を用い神経、骨格筋細胞への分化系培養が報告されているため、これを参考とし平滑筋細胞への分化系培養を試みた。一定期間細菌培養用ペトリデッシュにて浮遊培養(aggregation culture)を行った後、細胞を通常の細胞培養用ペトリデッシュへ移し接着させた。その後、数日の培養を行い、各種平滑筋細胞のマーカー蛋白質に対する抗体を用い、ウエスタン解析と細胞染色を行い結果を検討した。この培養期間中、各stageの培養時間や、分化刺激として添加するretinoic acid,DMSO等の添加時期、濃度等の条件を検討した。その結果、低濃度のretinoic acidを用いることにより多くの細胞が平滑筋細胞のマーカー蛋白である平滑筋型α-アクチンを発現することがわかり、他のマーカー蛋白質もin vivoの発生における時間的な発現様式に従い発現していることがわかった。また、発生初期に発現が見られる中胚葉のマーカー遺伝子もRT-PCRを用い検出されたことより、ES細胞を平滑筋初期発生の研究モデルとして使用することが適当と思われる結果が得られた。しかし、それらの発現量や、分化型平滑筋細胞のマーカー蛋白質であるカルデスモンは、1-型を示していた。また、一部には平滑筋の形質を示さない細胞も混在しているため、なおこの細胞培養系において細胞のcloningを含め改良が必要であると考えらた。現在、各種培地、添加剤等の検討を行っている。また発生した平滑筋細胞が、確かに完全に分化した状態のものであるか、生理学的機能を含め検討中である。

The culture of differentiation line of ES cells in vitro was reported. The culture of differentiation line of smooth muscle cells in vitro was tested. After a certain period of bacterial culture, cell culture is usually carried out. After a few days of culture, various smooth muscle cells were analyzed by antibody and cell staining. The culture period, culture time of each stage, differentiation stimulation, addition time and concentration of retinoic acid, DMSO, etc. were discussed. The results showed that low concentrations of retinoic acid were used in many cells, smooth muscle cells and protein were developed in smooth muscle α-cells, and other proteins were developed in vivo. The results of RT-PCR were obtained from the study on the early development of ES cells. The expression of protein in differentiated smooth muscle cells was detected by PCR. A part of smooth tendon shape is shown in the cell culture system, and the cloning of cells is necessary. Now, all kinds of cultivation, additive, etc. are discussed. The development of smooth muscle cells, the complete differentiation of the state, the physiological function of the study