心筋細胞内calpain活性動態の計測

心内钙蛋白酶活性动态的测量

• 批准号: 09770483
• 负责人: 松村 泰志
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770483/
• 关键词: Ca overload; 単離心筋細胞; calpain; fura red; 7-amino-4-chloromethylcoumarin; 顕微測光法

心筋細胞は、細胞内Ca濃度が著しく上昇すると障害されることが報告されており、虚血・再潅流障害の重要なトリガーになっていると考えられている。しかし、細胞内Caオーバーロードがどの酵素を活性化し、細胞障害に至るのかについて未だ明らかにされていない。平成5年度、6年度、7年度科学研究費の補助を受け、虚血・再潅流時の心筋障害時に、Zバンド周辺の構造蛋白が障害されていること、この変化は、再潅流時のCa濃度の上昇に起因していること、プロテアーゼ阻害剤が抑制に部分的効果があることを明らかにした。このことより、細胞内プロテアーゼ、特にcalpainが関与している可能性が考えられる。しかし、in vitroの実験では、calpainの活性化に必要なCa濃度は短時間の虚血再潅流時に到達するそれより高いこと、細胞内には、細胞内阻害蛋白であるcalpastatinが豊富に存在することことが知られている。そこで、心筋細胞内でのcalpainの活性動態を調べるために、平成8年度、9年度科学研究費の補助を受け、単離心筋細胞の系を用い、Ca indicatiorであるfura redと、calpainの蛍光基質であるBoc-Leu-Met-CMACを同時に細胞に取り込ませ、発生する蛍光を分離測定する系を作成した。その結果、心筋細胞内では、in vitroの結果よりはるかに低いCa濃度でcalpainが活性化されることが明らかとなった。そこで、今年度は、この系を用い、アシドーシス(細胞外液pH=7.0)、プロテアーゼ阻害剤(1eupeptin.calpain in hobotor I)の影響を調べた。その結果、いずれの阻害物質によってもcalpainの活性化は完全には抑制できないことが観察された。これらの阻害物質の細胞内calpain活性化への影響をより厳密に評価するためには、定量的評価が必要であり、今後の課題と考えらた。

Heart muscle cells は, concentration of intracellular Ca が し く rise す る と handicap of さ れ る こ と が report さ れ て お り 潅 again, empty blood flow handicap of important な の ト リ ガ ー に な っ て い る と exam え ら れ て い る. し か し, intracellular Ca オ ー バ ー ロ ー ド が ど を の enzyme activeness し, cell handicap of に to る の か に つ い て not だ Ming ら か に さ れ て い な い. Pp.47-53 5 year, 6 year, 7 annual scientific research の subsidies を by け 潅 again, empty blood flow when に の heart muscle handicap, Z バ ン ド weeks 辺 の structure protein が handicap of さ れ て い る こ と, こ の 潅 again - は, flow の Ca concentration rising の に cause し て い る こ と, プ ロ テ ア ー ゼ resistance against tonic が inhibit に part's working fruit が あ る こ と を Ming ら か に し た . こ の こ と よ り, intracellular プ ロ テ ア ー ゼ, に calpain が masato and し て い る possibility が exam え ら れ る. し か し, the in vitro の be 験 で は and calpain の activeness に な Ca concentration necessary は の empty when the blood flow of 潅 again short time arrive に す る そ れ よ り high い こ と, intracellular に は protein, cell internal resistance against で あ る calpastatin が aboundant に exist す る こ と こ と が know ら れ て い る. そ こ で, heart muscle cells で の calpain activity の dynamic を adjustable べ る た め に, pp.47-53 8 year, 9 year science の subsidies を け, 単 centrifugal muscle cells の を use い, Ca indicatior で あ る fura Red と and calpain の 蛍 light matrix で あ る bok - Leu - Met - CMAC を に に cells at the same time take り 込 ま せ, 発 す る 蛍 light を separation determination す を る department done し た. そ の results, the heart muscle cells で は, the in vitro results の よ り は る か に low い Ca concentration で calpain が activeness さ れ る こ と が Ming ら か と な っ た. そ こ で, our は "こ の を use い, ア シ ド ー シ ス (extracellular fluid pH = 7.0), プ ロ テ ア ー ゼ resistance against tonic (1 eupeptin. Calpain in hobotor I) の influence を adjustable べ た. The そ <s:1> result, the ずれ ずれ <s:1> harmful substance によって <s:1> calpain <s:1> is activated <s:1> completely に <e:1> and inhibited で な な とが観 とが観 and とが観 are observed された. こ れ ら の resistance against material の calpain activity in cells turn へ の influence を よ り 厳 dense に review 価 す る た め に は, quantitative evaluation of 価 が necessary で あ り, future と の subject exam え ら た.

项目成果

佐伯英次郎: "心筋細胞内のCa濃度及びプロアーゼ活性の同時測定" 医用電子と生体工学. 第36巻. 279 (1998)

Eijiro Saeki：“同时测量心肌细胞中的 Ca 浓度和蛋白酶活性”《医学电子与生物工程》第 36 卷（1998 年）。

佐伯英次郎: "単離心筋細胞における細胞内calpain活性とCa濃度の同時測定" 大阪大学医学雑誌. 第50巻第2号. 99-106 (1998)

Eijiro Saeki：“同时测量离体心肌细胞中的细胞内钙蛋白酶活性和 Ca 浓度”，大阪大学医学杂志，第 50 卷，第 2 期 99-106（1998 年）。