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アルツハイマー病脳のアミアロイドβ蛋白沈着阻害過程に関する分子生物学的研究

阿尔茨海默病脑内β淀粉样蛋白沉积抑制过程的分子生物学研究

基本信息

批准号：
09770750
负责人：
続佳代
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

これまで、アミロイドβ蛋白(Aβ)に結合するsequestrating蛋白のAβ凝集、沈着過程における役割を解明するために、ヒト剖検腎を対象に免疫病理学的、および生化学的検討を加えてきた。ヒト腎臓においてトランスサイレチン(TTR)がsequestrating蛋白として、Aβの凝集、沈着を阻害している可能性を示唆する結果が得られた。本年度は各Aβ分子種とTTRの関係を明らかにするために生化学的検討を加え、以下の結果が得られた。1) 免疫沈降:腎臓内でTTRとAβが結合して存在するかどうかを明らかにするために、免疫病理学的にAβ、TTRの存在が確認された凍結腎より遠心法にて粗抽出液を作成した。ヒト腎では分子量約15kDaのmonomerと分子量約35kDaのdimerのTTRが検出された。各抗体結合Sepharose 4Bにて免疫沈降を行うとBC42抗体で吸着・溶出された成分にはTTR-monomer、TTR-dimerのいずれもが検出されたが、BC40抗体ではいずれも微量しか免疫沈降されなかった。腎臓内のTTRにはAβ42が選択的に結合していることが明らかとなった。2) in vitro binding assay:免疫沈降において見られた所見を確認するために、さらにin vitroにおける各Aβ分子種とTTRの結合について検討を加えた。AβとTTRの反応産物を電気泳動すると、Aβ、TTR-monomer、およびTTR-dimerが染色された。Aβ42とTTRを反応させたときには、TTRにAβ42が結合した反応産物が検出されたが、Aβ40とTTRを反応させたときには、この結合物は認められなかった。3) in vitro overlay binding assay:膜上のAβ40、Aβ42にTTRを反応させると、TTRはAβ42に結合しやすかった。以上の結果よりTTRはin vivo、in vitroにおいて、より不溶型Aβ42に選択的に結合し、Aβ42はsequestrationされている可能性が示唆された。現在、培養腎細胞のcell lysateを用いて、各Aβ分子種に結合している蛋白の同定を試みている。

The combination of β protein and β protein (A β) with sequestrating protein A β agglutination, sedimentation and surgical excision were performed to understand the etiology and biochemistry of immunopathology and biochemistry. The expression of sequestrating protein (TTR), A β agglutination, and the possibility of blockage showed that the results showed that the results were negative. In this year's A β molecular TTR experiment, the results show that the biochemistry of each A β molecule has been increased. 1) immune sedimentation: the presence of TTR A β in combination with immunopathology, the presence of A β and TTR in immunopathology, and the presence of crude extractive fluid. The molecular weight is about 15kDa monomer. The molecular weight is about 35kDa dimer TTR. The antibodies were combined with Sepharose 4B immunoprecipitation and BC42 antibodies were used to absorb and dissolve the ingredient TTR-monomer, TTR-dimer antigens and BC40 antibodies. The combination of the selected TTR